海南坡鹿HSF1 cDNA的克隆与表达

【摘要】：对热休克转录因子1-HSF1,的研究对于热休克反应分子机制的阐释具有重要的理论意义。本研究通过RT-PCR和]RACE方法扩增海南坡鹿HSF1-hdHSF1, cDNA全长,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析；构建pET28a-hdHSF1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,克隆的hdHSF1cDNA全长2036 bp,含有1个1578bp的开放阅读框,编码525个氨基酸,目的蛋白是一个等电点为4.93的亲水性蛋白。hdHSF1 cDNA与赫里福德牛、小鼠和人HSF1 cDNA的同源性分别为98.99%、81.78%、87.82%；相应编码蛋白氨基酸同源性分别为98.86%、83.84%、89.06%,根据氨基酸序列构建不同动物HSF1蛋白的进化树,与采用传统分类法构建的进化树基本一致,说明实验成功克隆了hdHSF1基因。经IPTG诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约62kD的特异性抗体结合带,表明hdHSF1原核表达载体成功构建并表达。