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早期食管鳞状细胞癌患者外周血中外泌体lncRNA的表达和文献综述

郑文靖  
【摘要】:背景:我国食管癌发病人数在世界各国食管癌病例总数中排名第一,每年有约20万患有食管鳞癌(ESCC)的病人死亡。早期食管癌患者一般没有明显的临床表现,诊断困难,大多数食管癌患者得到确诊时已经发展至中晚期,而中晚期的预后远差于早期。因此在食管癌的早期予以及时的诊疗对于改善预后格外关键。液体活检是近年的研究热点,主要的实现方式为检测外周血或体液中的生物活性物质。外泌体由包括肿瘤细胞在内的大多数种类的细胞所分泌,是一种可存在于外周血和各种体液中的双层膜结构微小囊泡。lncRNA可影响包括肿瘤的发生和发展在内的多种细胞活动,而肿瘤细胞的lncRNA能在外泌体内选择性富集,并且能保持较高的完好程度。因此,通过检测食管鳞癌患者血浆外泌体内的lncRNA有望实现对早期食管鳞癌的早期诊断。目的:通过对早期食管鳞状细胞癌(ESCC)患者、良性食管炎病人和无食管疾病人群的血浆外泌体中的lncRNA和mRNA进行高通量测序和分析,筛选和识别早期ESCC特异性的新型外泌体分子标记物方法:1、分别收集6例年龄性别相匹配的早期ESCC患者、良性食管炎患者和无食管疾病健康对照者的血浆样本。2、用Ribo Exosomes Isolation Reagent Kit分离外泌体,通过激光粒度仪测定外泌体的大小分布以及粒子数,用Accuri C6流式细胞仪检测外泌体标记蛋白CD81、CD63来鉴定外泌体。3、通过高通量测序检测早期ESCC患者、良性食管炎患者和无食管疾病健康对照者标本组血浆外泌体lncRNA和mRNA的表达情况。4、利用数据处理软件对测序数据进行筛选,然后统计出各组样本lncRNA和mRNA的表达差异,并与数据库进行比对得出测序所得的lncRNA和mRNA的生物学作用。5、再分别收集5例年龄性别相匹配的早期ESCC患者和无食管疾病健康对照者的独立血浆样本,用q RT-PCR验证ESCC患者外泌体差异lncRNA的表达水平。结果:1、首次获得早期ESCC患者、良性食管炎和无食管疾病人群的血浆外泌体中全基因组lncRNA和mRNA表达谱。2、外泌体lncRNAs表达比mRNAs具有更紧密的食管组织特异性,更高的表达水平和更低的剪接效率。3、发现了可用于区分早期ESCC和食管炎的124个表达差异的外泌体lncRNAs。4、血浆外泌体lncRNA中的FAM138D,AL589739.1,AC008105.2,PTOV1-AS2,AC068134.2,WI2-85898F10.1有望成为早期诊断ESCC的lncRNA signature。结论:1、ESCC外泌体内可选择性富集lncRNA及mRNA。2、外泌体lncRNA比外泌体mRNA更适合作为疾病生物标志物。3、一组lncRNA(FAM138D,AL589739.1,PTOV1-AS2,AC068134.2,WI2-85898F10.1)可用于区分早期ESCC和健康对照的特异性外泌体。


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