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广西地方品系鸡ALV的分离鉴定和引发急性纤维肉瘤的ALV-J株感染性实验

杜杰  
【摘要】:本研究一方面对广西龙胜凤鸡、三黄鸡等地方品系鸡的祖代、父母代种群进行流行病学调查,开展禽白血病净化研究,将ELISA抗原检测为阳性的个体鸡的无菌血清感染成纤维细胞,提取前病毒DNA,进行核酸扩增和测序。另一方面,将临床上可引起急性纤维肉瘤的ALV-J的组织滤液以腹腔为接种部位感染裸鼠,并将发生急性纤维肉瘤的SPF鸡的新鲜肉瘤组织细胞悬液以腋下为接种部位接种裸鼠,研究缺陷型ALV-J对裸鼠的感染性。 通过禽白血病病毒的分离与鉴定,从地方品系龙胜凤鸡和土鸡中各分离到1株B亚群ALV,从三黄鸡中分离到8株J亚群ALV。序列分析结果显示龙胜凤鸡分离株GX-J-15的gp85氨基酸序列与国际上仅发表的4株B亚群代表毒株的同源性在91.7%以上,其中与山东地方品系芦花鸡分离株SDAU09C2的同源性高达98.1%;土鸡分离株GX-J-14的gp85氨基酸序列与5株B亚群代表株的同源性在89%-90%,远高于与其他亚群的同源性。而两个分离株的gp85氨基酸序列与J亚群代表毒株的同源性仅为50%左右;从三黄鸡中分离到的8株J亚群ALV,其gp85氨基酸序列与J亚群ALV参考株的gp85氨基酸序列同源性均在92%以上,而与其他亚群ALV的gp85氨基酸序列同源性均不超过54%,其中GX-J-12株与HPRS-103原型株的同源性达96.1%。本实验从广西特有的地方品系龙胜凤鸡和土鸡中各分离到一株B亚群ALV,从三黄鸡中分离到八株J亚群ALV,在之前,本课题组从三黄鸡中分离到一株A亚群ALV和一株E亚群ALV,并从麻鸡中分离到两株J亚群ALV,说明我国地方品种最丰富的广西已有所有亚群ALV的流行。通过序列比较分析发现,广西地方品系流行株gp85部分与国内外参考株均有较高的同源性,而3'LTR均已发生较大的变异,其中龙胜凤鸡分离株GX-J-15的gp85氨基酸序列与山东地方品系芦花鸡分离株SDAU09C2的同源性高达98.1%,可能来源于同一病毒的重组。 将急性纤维肉瘤的ALV-J之组织研磨滤液接种SPF雏鸡,雏鸡在14日龄出现肿瘤,在18日龄时雏鸡陆续死亡,将发生急性纤维肉瘤的SPF鸡的新鲜肉瘤细胞悬液接种于裸鼠,并将临床上导致急性纤维肉瘤的ALV-J之组织研磨滤液接种于裸鼠,持续观察40天,裸鼠的生长状态良好,剖解未发生肉眼可见的肿瘤及病变,通过病理组织切片观察和核酸扩增,结果也为阴性。说明急性纤维肉瘤细胞不易在裸鼠上成瘤,但其是否能引起裸鼠发生感染还需要进一步验证。


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