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柑橘木虱虫生真菌种类多样性调查及其致病力研究

黄元腾吉  
【摘要】:柑橘木虱(Diaphorina citri)是传播柑橘黄龙病的介体昆虫,目前,生产上对柑橘木虱的防治主要是施用化学药剂。随着国家对农药、化肥施用量“双减”概念的提出,生物防治被推到新的高度。利用虫生真菌防治农业害虫在生物防治中占有重要地位。开展柑橘木虱虫生真菌种类多样性调查及其致病力测定,可为生物防控柑橘木虱提供真菌资源及理论依据。经过形态学与分子生物学鉴定,从柑橘木虱体上共分离到52种1033个真菌菌株,其中属于虫生真菌的有15种710个菌株。在2019年6-10月间,柑橘木虱上的虫生真菌优势种有枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)、桔青霉(Penicillium citrinum)和草酸青霉(Penicillium oxalicum)。分别测定了17种真菌对柑橘木虱的致病性,结果发现4种虫生真菌对柑橘木虱成虫具有致病性,分别是刀孢蜡蚧菌(Lecanicillium psalliotae)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)和淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)。该4种虫生真菌对柑橘木虱成虫的LT_(95)分别为2.85d、4.65d、6.78d和45.66d,各种虫生真菌之间LT_(95)差异达到显著水平。选择刀孢蜡蚧菌7r163菌株和球孢白僵菌n67菌株作为研究对象,研究不同因素条件下该两株菌株对柑橘木虱的致病力变化,孢子萌发率及液体培养产孢量变化。当分生孢子的接种浓度为5.0×10~6、5.0×10~7、3.3×10~8孢子/m L时,刀孢蜡蚧菌7r163菌株对柑橘木虱的LT_(50)分别为3.67、2.42、2.21d,球孢白僵菌n67菌株对柑橘木虱的LT_(50)分别为4.46、3.61、3.08d,刀孢蜡蚧菌7r163菌株对柑橘木虱的LT_(50)显著低于球孢白僵菌n67菌株;当温度在23、27、31、35℃时,刀孢蜡蚧菌7r163菌株对柑橘木虱的LT_(50)分别为3.92、2.31、2.14、2.74d,球孢白僵菌n67菌株对柑橘木虱的LT_(50)分别为5.13、3.67、3.60、14.82d,刀孢蜡蚧菌7r163菌株对柑橘木虱的LT_(50)显著低于球孢白僵菌n67菌株;柑橘木虱成虫与若虫同时接种浓度为5.0×10~7孢子/m L的球孢白僵菌n67菌株分生孢子时,球孢白僵菌n67菌株对成虫与若虫的LT_(50)分别为3.61、2.28d,球孢白僵菌n67菌株对成虫的LT_(50)显著高于对若虫的LT_(50)。在15-35℃条件下,刀孢蜡蚧菌7r163菌株分生孢子在PDA培养基上12h的萌发率均达到99%以上,但在35℃条件下不能形成菌落;在15-31℃条件下,球孢白僵菌n67菌株分生孢子在PDA培养基上36h的萌发率均达到99%以上,但在35℃条件下不能萌发。刀孢蜡蚧菌7r163菌株分生孢子在PDA、WD培养基上8h萌发率均超过99%;球孢白僵菌n67菌株分生孢子在WD培养基上36h的萌发率为2.6%,显著低于在PDA培养基上的萌发率。刀孢蜡蚧菌7r163菌株分生孢子在相对湿度92%的条件下36h的萌发率为35.84%;球孢白僵菌n67菌株分生孢子在相对湿度92%的条件下72h的萌发率为19.45%。刀孢蜡蚧菌7r163菌株分生孢子在紫外光下照射4min时,其24h的萌发率为16.54%;球孢白僵菌n67菌株分生孢子在紫外光下照射4min时,其48h的萌发率为50.40%。以单因素实验设计探索不同液体培养条件对刀孢蜡蚧菌7r163菌株及球孢白僵菌n67菌株产孢量的影响。在p H=5.0、培养温度为27℃,孢子初始接入量为1.0×10~6孢子,培养时间5d时,刀孢蜡蚧菌7r163菌株的产孢量最大;在p H=6.0、培养温度为27℃,孢子初始接入量为0.6×10~6孢子,培养时间为10d时,球孢白僵菌n67菌株产孢量最大。


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