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酵母耐铜基因在荧光假单胞菌中的表达及重组菌株对萝卜苗吸收土壤铜的影响

吴圣进  
【摘要】: 1、本文通过重新设计引物,将SD序列添加至酵母耐铜基因CUPI编码序列前端,PCR扩增得到约200bp的CUPI片段,经测序证明扩增产物完全正确。将CUPI片段连于具有广泛宿主范围的柯斯质粒pLAFR,上,得到重组质粒pLAFR3CUPI,经三亲结合转移至荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)AS1.1381细胞,得到重组菌株AS1.1381/pLAFR3CUPI。抗铜实验表明,AS1.1381/pLAFR~CUPI重组菌株的抗铜能力(6mM Cu2‘)高于AS1.1381/pLAFR,(4.5mM Cu2*),重组菌株抗铜性得到提高。 2、根部定殖试验表明,无铜处理下,AS1.1381/pLAFR3CUPI和AS1.1381/pLAFR,在萝卜根部的定殖能力相同;不同部位的定殖数量为:根表〉根围土,不同接种方式相比,根表的定殖为:浸种方式〉土壤灌注,根围土中的定殖则为:土壤灌注〉浸种;接种30天内,根部的定殖数量随时间而缓慢下降;相同铜浓度下,AS1.1381/pLAFR3CUPI的根部定殖数量大于AS1.1381/pLAFR,,且可在更高的土壤铜浓度下定殖。 3、土壤中CuSO,处理浓度在1~7mmol/kg土时,AS1.1381/pLAFR3CUPI可减少萝卜植株对铜的吸收,缓解过量铜对萝卜生长的抑制;AS1.1381/pLAFR,则在土壤铜处理浓度为1~5mmol/kg土时才发挥作用;相同浓度铜处理下,AS1.1381/pLAF~CUPI缓解铜毒、促进生长的作用大于AS1.1381/pLAFR3。


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