马铃薯PTOM1基因全长cDNA的克隆及其RNAi转基因植株的构建

【摘要】：在Genebank中搜索到与拟南芥中支持烟草花叶病毒复制的基因TOM1序列具部分同源的马铃薯EST序列。用特异性引物和RACE方法，从马铃薯(F-28-1)中克隆到与拟南芥AtTOM1基因具同源性的马铃薯PTOM1基因，PTOM1全长cDNA有1257个碱基对，编码245个氨基酸，是一个含有五个跨膜区结构的蛋白。PTOM1 cDNA与拟南芥AtTOM1 cDNA有59.1％的同源性。二者的编码产物有70.3％的同源性。为了研究PTOM1基因在RNA病毒侵染马铃薯过程中的作用，构建了以下一系列的植物表达载体和病毒表达载体：(1)将PTOM1 cDNA反义构建于表达载体；(2)将PTOM1 cDNA分为两段分别构建RNA干涉质粒；(3)用基因组PTOM1基因片段构建反义表达载体；(4)将PTOM1 cDNA反义构建于病毒表达载体PTVOO。将用上述方法得到的表达载体导入农杆菌并用于侵染马铃薯得到转基因马铃薯植株，PCR检测表明外源基因已整合入马铃薯染色体上。同时，我们建立了高效快速的马铃薯转化系统，转化率达65％以上，可在5-7周之内得到抗性植株。