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水牛卵巢卵泡颗粒细胞凋亡的生物学特征

李恭贺  
【摘要】:哺乳动物的绝大多数卵泡在其发育过程中闭锁退化,只有少数卵泡发育成熟至排卵。虽然有众多学者对卵泡闭锁这一现象做了大量的研究,但就其机理方面仍需进一步探索。本实验主要以水牛为实验动物进行了一系列的研究,主要包括以下内容: 1、水牛卵巢健康卵泡和闭锁卵泡组织切片的光学显微镜观察、电子透射显微镜观察、体外颗粒细胞的荧光显微镜观察。结果发现卵泡细胞凋亡的典型特性:染色质凝聚、分块、位于核膜上,呈核固缩;胞质凝缩,细胞器聚集,镜下被浓染;细胞膜皱缩,成不规则状;闭锁卵泡中有大量由完整膜包被的凋亡小体,分布在卵泡膜细胞间隙和卵泡腔内;荧光显微镜下凋亡颗粒细胞呈明亮的蓝色,健康细胞染色较淡。 2、在健康卵泡和闭锁卵泡中颗粒细胞的DNA电泳均不能看到“ladder”图谱。健康卵泡颗粒细胞DNA链无断裂,电泳无拖尾发生,而闭锁卵泡颗粒细胞DNA链有大量断裂,电泳下呈“smear”状。 3、用TUNEL法对水牛卵巢健康卵泡和闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡频数的判定,结果显示在健康卵泡中几乎未见TUNEL阳性细胞,而在闭锁卵泡中有大量的TUNEL阳性细胞,这也反映凋亡细胞(或坏死细胞)有很多DNA断口可被阳性染色,颜色呈黑褐色。 4、Fas基因在水牛卵巢内的定位分析:颗粒细胞层、粒膜细胞层和基质内均有Fas的表达,颗粒细胞层的Fas蛋白表达最多,闭锁卵泡比健康卵泡Fas蛋白表达多。


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