广西巴马小型猪生长激素及其受体基因的克隆和猪生长激素内含子3缺失多态性分析

【摘要】：广西巴马小型猪是由广西巴马香猪多代近交培育而成的实验用小型猪，其主要特征是体型矮小。关于体型矮小变异的分子遗传基础，多集中在人的Laron型侏儒症和性连锁矮小鸡的研究，小型猪的分子遗传背景研究较少。 本研究根据生长激素和生长激素受体的生物功能、生理效应及前人的研究成果，将其初选为影响广西巴马小型猪体型矮小的候选基因，拟通过克隆获得基因核酸的一级结构信息。根据GeneBank登录的pGH基因全序列和pGHR cDNA序列，设计特异性引物，分别以基因组DNA和肝脏总RNA反转录产物为模板扩增GH基因和GHR胞外域、胞内域片段，然后连到pMD18-T载体，筛选阳性重组子测序。结果显示，广西巴马小型猪与五指山猪GH基因全序列相比，同源性高达99％，不存在缺失；与普通猪相比在内含子3有连续7bp和15bp的缺失；与太湖猪相比，在内含子3同样位置只有连续15bp缺失。利用DNAStar软件将GHR的胞外域和胞内域序列拼接成完整的GHR cDNA，与普通猪GHR cDNA相比，同源性为99％，有7处发生碱基突变，其中两处为同义突变，一处为终止密码子突变，四处为错义突变。在错义突变中有三处为非保守性取代，取代的氨基酸理化性质改变较大。 基于试验一的研究结果，设计另一对特异引物扩增广西巴马小型猪、大约克、杜洛克和环江香猪GH内含子3，通过PAGE和银染判断在内含子3是否存在缺失。结果显示，大约克、杜洛克和环江香猪内含子3电泳条带在一条直线上且与普通猪(Sus Scrofa)GH内含子3大小一致，说明这三个品种不存在7b0和15bp缺失。而广西巴马小型猪与这三个品种相比GH内含子3少了约20bp。