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甘蔗内生固氮菌的分离与鉴定

苏俊波  
【摘要】:甘蔗糖业是广西的重要经济支柱之一,甘蔗生物固氮及其应用的研究对于在甘蔗生产中节约氮肥成本、减少环境污染具有非常重要的意义。甘蔗的生物固氮在巴西开展了较为系统深入的研究,一百多种与甘蔗联合固氮的细菌已经被分离得到,然而没有系统地归类;不同地区不同品种的甘蔗固氮能力存在较大差异,所得到的内生固氮菌也不同。 本实验以106个甘蔗品种为材料,从其中的12个中筛选分离得到二十二个具有较高的将乙炔还原成乙烯能力的菌株。对这些菌株进行了形态学的观察、碳源利用的测定、生理生化测定、生长因子测定以及部分菌株16Sr RNA基因序列的鉴定,结果表明: 1.所有菌株都能在液体和固体培养基中生长,菌落形态多为圆形或椭圆型,菌落致密,表面光滑有光泽,呈粘稠状,浅黄色或无色,半透明,无气生菌丝,菌落的直径大小不同,从1~2mm至4~6mm不等。 2.24个菌株中有18个为格兰氏染色阴性,4个为阳性。大部分细菌能利用单糖类和醇类作为碳源,厌氧或兼性厌氧;淀粉酶、尿酶、氧化酶、明胶水解、硝酸还原、柠檬酸盐的利用、产生H_2S、产生吲哚等生理生化指标则各有不同。 3.所分离到的菌株都能在较大范围的盐浓度、糖浓度、温度和pH值下生长,在含盐量0~12%,含糖量0~35%之间,温度15~40℃以及pH4~10之间均能正常生长。 4.利用16S rRNA基因克隆将其中的6个具有代表性的菌株进行鉴定,相互之间可非常明显地鉴别开来。将其中的4个菌株测序表明,CP74-2005、广12大属于肠杆菌科,克雷伯氏菌属,肺炎克雷伯氏菌种;B5与假单胞菌科,假单胞菌属,门多萨假单胞菌种非常相似;83/271则有可能属于一个新的固氮细菌。


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