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β-甘露聚糖酶产生菌的选育及发酵条件的研究

蒙海林  
【摘要】:本论文以魔芋、番鬼芋、土壤、海水等从自然界采集到的样品为实验材料,经过富集培养、分离纯化、选择性平板分离,筛选出200株产β-甘露聚糖酶的菌株,再经过平板水解圈初筛得到20株酶活较高的菌株,经过摇瓶复筛,选出一株酶活最高的菌株(编号为C3),其酶活为15.66U/mL。对C3进行16S rDNA序列测定,并在互联网上与其它菌株的相关序列进行比对,结果发现C3是一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 对C3进行~(60)Co诱变,经过分离、平板水解圈初筛和摇瓶复筛,得到一株酶活为31.89U/mL的菌株(编号为N40),其酶活是出发菌株的2.04倍。再对N40先后进行了三次紫外诱变和筛选,但却遗憾地没有获得酶活更高的菌株。 对N40菌株的发酵产酶条件进行研究,发现最佳产酶条件为:1.0%瓜儿豆胶作碳源,0.5%NH_4Cl+0.5%Tryptone作氮源,培养基其它组分为MgSO_4·7H_2O 0.1%,KH_2PO_4 0.05%,Na_2H PO_4 0.05%,pH 7.0,接种量为1%,发酵温度为37℃,摇床转速为160r/m,摇瓶装液量为100mL(500mL三角瓶)。在此发酵条件下发酵24h,该菌产生的β-甘露聚糖酶活力为39.07U/mL,是优化前的1.23倍。 对N40菌株所产的β-甘露聚糖酶酶学性质进行了初步研究,初步确定


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