正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库部分EST序列的电子克隆及初步实验验证
【摘要】:近来,通过电子克隆而获得的猪新基因多与猪的毛色、脂肪代谢、肉质、生殖机能等重要经济性状相关,而与猪体先天性及特异性免疫反应相关的基因鲜有报道,本研究拟探寻利用生物数据库进行电子克隆获得部分乃至全长基因的方法,试图快速克隆出影响病毒复制及抗病毒免疫相关的猪新基因。
本研究对来自正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库测序所得的部分EST序列进行了电子克隆,形成了20条片段重叠群(contigs)。对20条contigs进行了基因注释,证实它们均得到了有效延伸,具有完整开放阅读框,其中已知的猪基因序列14条,猪新基因序列6条,分别从已知猪基因序列和未知猪基因序列中各抽取一条感兴趣序列进行全长cDNA的预测,它们的编号分别为EST contig110和EST contig133,设计特异引物对两条候选序列进行克隆与测序,结果与电子克隆所得序列一致,证实了电子克隆的有效性。本研究还对猪的新基因——60S核糖体蛋白L18a亚基作了蛋白质基本理化性质、疏水性和二级结构的初步预测。人的这个蛋白与丙型肝炎病毒mRNA上的内部核糖体入口序列产生相互作用,在病毒蛋白的正确翻译过