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大叶栎遗传多样性研究

梁文汇  
【摘要】: 本研究选用一种快速、简便、可靠的分子标记——ISSR技术,探讨广西区内的大叶栎居群的遗传多样性。主要研究结果如下: 1、对大叶栎总DNA的两种提取方法进行对比研究,发现,无论从外观、产量、纯度还是电泳检查,改良CTAB法均优于硅珠吸附法。 2、建立了适于大叶栎ISSR扩增的反应体系:总体积20μL,DNA模板60ng、10×buffer 2.0μL,底物0.25μmol/L,引物0.3μmol/L,Taq DNA聚合酶1U。扩增反应的程序:预变性,94℃5min;变性,94℃45s;退火,51.2℃~54℃45s;延伸,72℃1.5min,45个循环;完全延伸,72℃7min;4℃保存。 3、从100条ISSR引物中筛选出11条带清晰、多态性丰富的引物用于大叶栎DNA模板的扩增,它们分别是810、811、834、836、840、841、842、843、844、857和864。 4、采用ISSR分子标记对六堡、高基、灵川、古谭、田东和垌中六个居群(每个居群30个样本)的大叶栎进行了遗传多样性和遗传结构研究。11条引物扩增得到151个清晰的条带,其中多态带132个,多态带百分率(PPB)为78.12%。POP Gene(Version 1.31)软件分析结果表明,高基居群的遗传多样性水平最高(PPB=68.87,He=0.2216,I=0.3333),居群的遗传结构分析表明,总的遗传变异有81.54%存在于居群内,而居群间的遗传变异占总变异的18.46%。UPGMA聚类分析可知,六个群体分为两支:其中一支中六堡和高基居群的遗传距离最小,先聚类在一起,然后和灵川居群聚合;在另外的一支中,古谭和田东聚类在一起再和垌中居群聚合,这两支才最后聚合到一起。 5、提出了广西大叶栎种质资源的保存、利用策略。


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