广西巴马小型猪促生长激素释放激素成熟肽基因克隆及其真核表达质粒对小鼠生长效应的研究

【摘要】： 促生长激素释放激素(Growth Hormone Releasing Hormone，GHRH)是一种蛋白类激素，由下丘脑合成并分泌。它能特异的诱导垂体生长激素(Growth Hromone，GH)的合成与分泌，对脊椎动物的生长、发育及代谢调控起着极其重要的作用。 本研究以广西巴马小型猪基因组DNA为模板，用特异性引物扩增GHRH外显子3，以外显子3为模板，用引物延伸悬挂PCR法扩增GHRH成熟肽序列，纯化后，连接到PMD18-T载体，转化到大肠杆菌，筛选阳性克隆，测序，同源性比较。结果表明：克隆的广西巴马小型猪GHRH成熟肽序列全长为132bp，其中外显子3基因序列长105bp。广西巴马小型猪GHRH外显子3基因序列与GenBank(NCBI)中报到的猪的GHRH外显子3相比：同源性为97.14％；在第84位、98位、100位发现三处碱基突变，均为转换，点突变均为无义突变。说明广西巴马小型猪的矮小体型与GHRH成熟肽分子结构之间没有直接的关系。 为探讨注射GHRH真核表达质粒对动物生产性能的影响，本研究选择平均体重为14.05±5.48g的小鼠42只，按性别相同，体重相近，两两配对，分为空质粒组和PEGFP-GHRH组。试验开始，在空质粒组小鼠右腿胫骨部肌肉按0.5μg质粒／g体重注射PEGFP-N1质粒，同时PEGFP-GHRH组小鼠在相同部位按0.5μg质粒／g注射PEGFP-GHRH质粒。35天试验结果表明：外源的GHRH在肌肉中获得了表达。GHRH基因至少可以在小鼠体内滞留15天。注射PEGFP-GHRH质粒对小鼠的生长有一定的改善作用，从注射后第10天至25天，PEGFP-GHRH组体重显著高于空质粒组(P＜0.05)。0～25天，PEGFP-GHRH组小鼠日增重比空质粒组提高12.3％(P＜0.05)。