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薄层原位反射光谱定量方法的研究

张小玲  
【摘要】:薄层扫描法定量分析多采用反射法,漫反射光的行为复杂,仪器光路较复杂;以反射吸光度定量分析,仅适用于低浓度范围,线性范围较窄;以单波长或双波长采集数据,数据量小,精密度低,而多波长扫描仪器价格较昂贵。因此,迫切需要提高薄层扫描仪的光学分辨率、调整光路减少杂散光的影响、降低薄层色谱扫描仪器成本以及对定量分析方法进行研究。本研究以光纤作为光的传导方式、基于CCD阵列的微型光谱仪、照明光源和移动平台组成的薄层原位反射光谱测试系统代替传统的薄层扫描仪用于薄层定量分析,对薄层色谱定量的方法及误差来源进行分析研究,旨在建立可靠的薄层原位反射光谱的定量分析方法。 研究主要包括以下四个方面内容: (1)构建薄层原位反射光谱的测试系统,以“弓”形二维移动方式扫描斑点,设置间隔记录时间记录斑点对应位置多个波长下的光度响应值。以非那西丁和咖啡因为分析对象,结果表明非那西丁斑点点样量在2.00-24.00μg范围内,反射吸光度和K-M函数值与斑点点样量的线性相关系数r分别为0.9805和0.9990,将斑点点样量范围缩小到2.00-10.00μg和8.00-24.00μg,线性关系均达0.9933以上,与反射吸光度相比,K-M值与斑点点样量线性相关性更好。考察速度扫描对定量分析的影响,咖啡因斑点面积上的K/S值随扫描速度增加而减小,扫描速度在0.962-3.282mm/s范围内对K-M值与斑点含量的线性关系影响不显著。 (2)以绿原酸为分析对象,考察薄层原位反射光谱法分析的准确度。以斑点采集对应点位置与光强度响应的关系识别薄层定量分析的误差来源;在波长230.49–374.00nm范围内,斑点面积上K-M值与绿原酸含量的线性相关系数r=0.9995;以金银花提取液为背景,加样回收实验,回收率为100.67%,相对标准偏差(RSD)为1.61%(n=7),表明该方法具有良好的精密度和准确度,可满足定量分析的需求。 (3)建立多波长薄层原位反射光谱法测定金银花中绿原酸含量的方法。以含水量为75%微乳液和甲酸(6:1)为展开剂,在聚酰胺薄膜上分离金银花提取液中的绿原酸。实验结果表明,斑点面积上K-M值与绿原酸含量有良好的线性关系,以外标两点法计算金银花中绿原酸的含量为4.983mg/g,RSD为2.35%(n=6),平均回收率为98.87%,RSD为2.90%,检出限为19ng。高效液相色谱法测得金银花中绿原酸含量为5.158mg/g。本法测得结果与高效液相色谱结果基本一致。 (4)对金银花提取液薄层色谱分离过程行为进行了分析探索。经薄层分离后,金银花提取液在聚酰胺薄膜上出现10个斑点,提取分离斑点色谱峰上的光谱图;对薄层分离过程进行分析,为薄层色谱展开条件的优化提供研究基础。


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