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龙眼肉提取物对东莨菪碱所致拟痴呆大鼠学习记忆的影响及机制研究

骆萍  
【摘要】:学习和记忆是大脑的高级功能,是脑的高级神经生理活动,是构成智能的要素。智力障碍是老年人常见的临床症状,也是年龄老化的一个主要标志,更是阿尔茨海默病(AD)即老年性痴呆的早期和主要临床症状之一。随着社会人口老龄化,AD患者比例增加,由其带来的学习记忆障碍问题日益突出,且目前缺乏有效的治疗方法。龙眼是传统的益智中药,具有丰富的药用价值和保健功能。广西开发龙眼资源有着得天独厚的优势。 本研究以广西大新石峡产龙眼干果肉为研究药材,利用超声浸提技术制备龙眼肉的水提物(ALEA)和龙眼肉醇提物(ALEE);以大鼠为试验对象,采用急性腹腔注射东莨菪碱建立记忆获得性障碍的拟痴呆动物模型;探讨ALEA和ALEE对东莨菪碱所致拟痴呆大鼠学习记忆行为学、自由基代谢、胆碱能神经递质水平和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平的影响,较为系统的研究了龙眼肉提取物对东莨菪碱所致拟痴呆大鼠的学习记忆改善作用及其作用机制,为将其开发为新的抗痴呆药物提供一定理论依据,为广西龙眼的开发和利用提供新的途径。 1 ALE的制备和对小鼠的急性毒性研究 通过超声浸提技术制得ALEA和ALEE,其中制备ALEE所用乙醇的回收率约为98%;通过预实验无法测出ALE的半数致死量(LD50)和最大耐受量(MTD),故用最大给药量(MLD)来评价ALE对小鼠的急性毒性,结果显示ALEA和ALEE小鼠一日内口服MLD分别117g生药·kg-1和135g生药·kg-1,分别相当于60kg人最大日用量的117倍和135倍,该剂量下小鼠未出现严重的中毒反应和明显的内脏器官病变,提示该剂量下的龙眼肉无明显毒性。 2 ALE对东莨菪碱所致拟痴呆大鼠学习记忆行为学和自由基代谢的影响 采用训练前急性腹腔注射东莨菪碱3mg·kg-1建立记忆获得性障碍的拟痴呆大鼠模型,应用Morris水迷宫进行定位航行试验和空间搜索试验,水迷宫测试结束后,采用分光光度法检测各组大鼠血清、海马和大脑皮层中、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量。结果显示,与模型组比较,ALE各组能明显减少潜伏期和首次穿台时间,显著增加第一象限时间、第一象限路程百分比和穿台次数,并能明显提高血清、海马和大脑皮层中SOD和GSH-Px活性,显著降低MDA含量。提示ALE可能通过提高机体抗氧化能力,清除体内过量自由基而改善东莨菪碱所致拟痴呆大鼠学习记忆障碍。 3 ALE对东莨菪碱所致拟痴呆大鼠海马胆碱能水平的影响 采用分光光度法检测各组大鼠海马乙酰胆碱酯酶(TchE)活性,二步免疫组化法检测乙酰胆碱转移酶(ChAT)在海马的表达,同时通过HE染色观察大鼠海马的形态学变化。结果显示,与模型组比较,ALE各组能明显增加大鼠海马中ChAT的表达,显著降低TchE活性,并改善东莨菪碱对大鼠海马组织的损害程度。提示ALE能通过减少乙酰胆碱(ACh)降解和促进ACh合成而增加大鼠脑内ACh含量,改善东莨菪碱所致拟痴呆大鼠的学习记忆障碍。 4 ALE对东莨菪碱所致拟痴呆大鼠海马GFAP水平的影响 采用二步免疫组化法检测各组大鼠海马中GFAP的表达。结果显示,与模型组相比,ALE各组均能显著降低GFAP的表达强度。提示ALE能抑制GFAP的过度表达,减少有害物质的生成,减轻东莨菪碱对大鼠海马组织的损害程度。 综上所述,ALE能改善东莨菪碱所致拟痴呆大鼠学习记忆障碍,作用机制可能与其清除自由基、减少ACh的降解、促进ACh的合成和抑制GFAP的过度表达等因素有关。


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