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鲎血超氧化物歧化酶的提取及其部分理化性质和抗氧化作用的研究

李俊  
【摘要】:目的:应用制备鲎试剂产生的废料血浆为原料,研究提取超氧化物歧化酶(SOD)的最佳方法,纯化得到电泳纯的鲎血SOD,并对其部分理化性质进行分析鉴定。 方法:采用热变性,超滤,Q Sepharose F.F离子交换柱层析,Sephadex G-50凝胶过滤等生物技术分离纯化SOD,并对其部分性质进行分析鉴定。运用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子量及其纯度。 结果:从鲎血中成功分离出SOD,获得该酶的比活力为3849.26U/mg,纯化倍数为62.18,回收率为60.63%,最大紫外吸收波长264nm,缓冲液pH值在5~9范围内酶稳定性好,在65℃内加热20min,可有效去除杂蛋白而不影响酶活性。纯化后的鲎血SOD经SDS-PAGE检测显示单一条带,测得分子量约为34kDa。 结论:该方法能够有效地从鲎血中分离纯化SOD,可用于从大批量的废料鲎血中提取SOD。 目的:通过对鲎血SOD提取物的小鼠灌胃急性毒性实验研究,对其安全性作出初步评价,为临床安全用药提供依据。 方法:通过预实验,判断测定半数致死量(LD50)的可能性,并据此测定LD50或最大给药量。 结果:预实验灌胃给药后全部动物健存,未见任何毒性反应,进行最大给药量试验。鲎血SOD最大给药量为1159.2mg/kg。 结论:鲎血SOD未见有明显的毒性,表明本品安全性较高。 目的:研究鲎血中超氧化物歧化酶对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗氧化作用及其作用机制。 方法:昆明种小鼠96只,随机分为空白对照组,衰老模型组,维生素E组,鲎血SOD高、中、低剂量组,每组16只。除空白对照组外,每组每天均采用D-半乳糖120mg/kg颈背部注射,连续给药42d,同时鲎血SOD高、中、低剂量组每天分别灌胃给药231.84mg/kg、115.92mg/kg、57.96mg/kg,维生素E组灌胃给药100mg/kg。观察各组小鼠行为、形态的改变,并于42d后采用试剂盒分别检测血清、肝脏、脑中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)含量。 结果:经小鼠的生化指标检测,衰老模型组与空白对照组相比,小鼠血清、肝脏、大脑中SOD、GSH-Px活力均下降,MDA含量增加。与衰老模型组相比,鲎血SOD及维生素E给药治疗组小鼠血清、肝脏中SOD活力和血清、脑中GSH-PX活力均明显上升,脑中SOD活力和肝脏中GSH-PX活力均未出现明显变化;鲎血SOD组小鼠血清和脑中MDA含量均明显降低,肝脏中MDA含量无明显差异;维生素E组小鼠血清、肝脏、脑中的MDA含量均明显下降。 结论:鲎血SOD对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠有较好的抗氧化作用,能显著的提高小鼠体内的SOD、GSH-PX水平,降低MDA含量。


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