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龙血竭对糖尿病大鼠烫伤创面修复作用的实验研究

张宪发  
【摘要】:背景:研究证明龙血竭有促进创伤愈合、抗血小板聚集、抗炎镇痛、抗菌抗氧化等生物活性。目的:针对中药龙血竭对创伤组织修复的积极作用,本实验通过建立糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤皮肤组织模型,在创面组织愈合过程中外用中药龙血竭,于烫伤后第1天、第3天、第5天、第7天、第11天、第15天和第21天应用免疫组化方法检测创面皮肤组织中P物质、TGF-β1和Bcl-2表达的动态变化探讨龙血竭促进糖尿病性创面愈合过程中可能的分子生物学机制。方法:选取Wistar大鼠112只,雌雄不限,随机分为四组,每组各28只,即:龙血竭外用组、磺胺嘧啶银外用组、糖尿病性空白对照组和正常鼠空白对照组。其中前三组为糖尿病烫伤模型,后一组为正常烫伤模型,各组模型烫伤深度均为深Ⅱ度。各组分别采用不同的干预措施,分别是:龙血竭外用组,在创面烫伤组织清创血痂,清除表面坏死组织后,龙血竭应用组外用于创伤组织表面,并每日换药,直至创面完全愈合;磺胺嘧啶银外用组,创面外用适量SD-Ag,无菌辅料缝合加压包扎,每日换药;糖尿病空白对照组,创面清创削痂后无菌敷料包扎,每日换药:正常空白对照组,创面处理同糖尿病空白对照组。在创面愈合过程中不同时相点检测各组创面愈合率及各组创面全层皮肤组织,并定期测定创伤组织中的P物质、TGF-β1和Bcl-2表达的变化。结果:1.病理学观察:糖尿病空白对照组烫伤后第1天,创面真皮基底组织中即有大量的包括中性粒细胞在内炎性细胞出现,然后逐渐下降;创伤后第3天成纤维细胞开始增值,并于创伤后第7天时达到高峰,为创伤组织局部的主要细胞。烫伤创面组织局部使用龙血竭后,临床观察到创伤愈合的时间提前。组织病理学观察示创伤组织中的中性粒细胞数量的下降明显增快,成纤维细胞峰值出现的时间明显提前并且数量显著增多,表明龙血竭有明显的促进创伤组织愈合的作用,并且这种作用在一定程度上与使用龙血竭后局部成纤维细胞的形成和数量的变化有关。2.创面愈合率:烫伤后第1天和第3天各组创面愈合率组间差异无统计学意义(P0.05)。第5天和第7天龙血竭外用组创面愈合率低于正常空白对照组(P0.05)高于糖尿病空白对照组(P0.05)。从第11天起,龙血竭外用组创面愈合率与磺胺嘧啶银外用组开始出现统计学差异(P0.05)。第21天,各组创面愈合率高低为正常空白对照组龙血竭外用组磺胺嘧啶银外用组糖尿病空白对照组,且组与组之间差异有统计学意义(P值0.05)。3.免疫组织化学结果3.1各组创伤前大鼠正常的皮肤组织中,P物质(SP)阳性表达较少,甚至呈阴性表达,阳性细胞的数量很少;从创伤后第1天开始直到创伤后第3天观察,创伤局部SP阳性表达未发现明显变化,至第5天开始阳性表达逐渐增强。创伤局部SP阳性细胞的数量均显著的高于创伤前。烫伤后第15天正常对照组P物质阳性表达水平最高,峰值显著高于其余三组,以后逐步减弱。龙血竭组、SD-Ag组和糖尿病对照组于烫伤后第21天阳性表达最强,且龙血竭组表达明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P0.05)。创伤愈合中龙血竭处理对SP在局部的表达有一定的影响。3.2龙血竭组和正常对照组于烫伤后第3天TGF-β1于毛囊部位开始呈现弱阳性表达,SD-Ag组和糖尿病对照组表达为阴性,以后表达逐步增强;龙血竭外用组于第7天TGF-β1阳性表达最强,明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P0.05),但低于正常空白对照组,以后表达逐渐减弱;SD-Ag组和糖尿病对照组阳性表达高峰出现于第11天,且组间差异无统计学意义(P0.05)。这说明糖尿病大鼠烫伤皮肤组织TGF-β1表达明显低于非糖尿病大鼠,这可能与复杂的内环境分子作用机制相关。另一方面,我们可以发现龙血竭可明显使TGF-β1表达提前并且阳性表达增强。3.3烫伤后第3天各组创面毛囊部位和血管周围开始出现Bcl-2阳性表达,以正常空白对照组表达最强,三组糖尿病模型间无统计学差异(P0.05);第15天各组阳性表达最强,龙血竭外用组与SD-Ag组和糖尿病对照组差异有明显统计学意义(P0.05),龙血竭外用组与正常对照组间则无明显统计学差异(P0.05)。上述结果表明,以上几种免疫因子均参与了创伤愈合的过程,这些免疫因子之间存在着十分密切的关系。龙血竭促进刨伤愈合的作用与对这些免疫因子的影响有关。结论1.龙血竭外用能明显促进糖尿病烧伤创面愈合。2.龙血竭在糖尿病创面愈合过程中,可以促进P物质的表达,通过调节创伤组织神经肽的途径促进创面愈合。3.龙血竭可以明显刺激创面TGF-β1的表达,促进ESCs的增殖分化,有利于创面的再上皮化。4.龙血竭可以影响Bcl-2抑制细胞凋亡的作用以利于糖尿病创伤愈合。


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