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小鼠感染P.marneffei后机体免疫变化的实验研究:Th1/Th2转录因子及细胞因子在其中的变化

毛从政  
【摘要】:目的探讨转录因子T-bet、GATA-3及相关细胞因子在经呼吸道感染马尔尼菲青霉病小鼠的表达情况,初步探索PM感染后机体免疫反应产生类型。方法24只雌性BALB/C小鼠按随机数字表法分为对照组、实验组,每组12只。在PDA培养基上25℃培养7天的PM产生大量真菌孢子,将其制成活菌悬液,调整孢子浓度为5×107个菌落形成单位(Colony-forming-units,CFU)/ml;滴鼻经呼吸道感染实验组小鼠14天,对照组小鼠不做任何处理。取部分肺组织进行真菌培养,部分肺组织经固定、脱水、包埋、切片后用苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)及过碘酸锡夫(Periodic acid-Schiff,PAS)染色观察肺组织病理变化;收集血清及肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测法测定两组血清及 BALF 中的 IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10、IgG1、IgG2a 含量;实时荧光定量 PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白印迹(Western blot,WB)法检测肺组织中转录因子T-bet、GATA-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果肺组织经真菌培养7-10天,实验组12只小鼠肺组织培养后均有PM生长,镜下形态观察有典型PM特征,符合阳性标准,阳性率达到100%,病理改变均为以细支气管为中心的化脓性炎症反应,大量炎症细胞浸润,部分病灶有融合倾向,局部有脓肿形成趋势,管壁周围巨噬细胞增多,PAS染色可见较多紫红色圆形PM孢子;实验组BALF及血清中IFN-γ、IL-12、IgG2a含量明显高于对照组(P0.01),实验组BALF及血清中IL-4、IL-10含量明显低于对照组(P0.01),实验组BALF中IgG1明显低于对照组(P0.01),血清中IgG1明显低于对照组(P0.05);实验组T-betmRNA及蛋白水平均高于对照组(P0.01),GATA-3mRNA及蛋白水平均低于对照组(P0.01)。结论(1)滴鼻经呼吸道感染可以使正常小鼠致病;(2)感染后小鼠其Th1细胞因子及转录因子表达增强,Th2细胞因子及转录因子表达减弱;显示Th1/Th2免疫失衡可能在PSM的发生发展过程中发挥重要作用。


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