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藿夏胶囊体内外抗肿瘤的作用研究

韦云妮  
【摘要】:目的:探究藿夏胶囊在体内外抗肿瘤的活性。方法:1、采用MTT法检测藿夏胶囊对体外培养的人肺癌NCI-H460细胞、人肝癌Hep G_2细胞、人卵巢癌SKOV-3细胞的抑制作用;AO-EB双染法观察药物对细胞形态学的影响。2、建立移植瘤模型,按模型组,环磷酰胺(CTX)阳性组,低中高3个剂量藿夏胶囊提取物组进行分组(各6只)。另取6只正常裸鼠作为正常对照组,正常对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水,CTX组以浓度为0.025 g/kg腹腔注射,藿夏胶囊组分别以2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg的剂量灌胃。阳性组每周三次,其他组每天一次,持续给药两周;在给药期间,每天观察并记录裸鼠的精神、行为、饮食、肿瘤生长等情况;停药次日,先将裸鼠称重,测量移植瘤体积,再处死裸鼠,剥离瘤体待用;3、全自动血液分析仪测各组荷瘤鼠的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿酸(UA)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)、球蛋白(GLB)、血清白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测瘤小鼠血清及肿瘤组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量;羟胺法测肿瘤组织中超氧化物歧化酶(SOD)含量;硫代巴比妥酸法测肿瘤组织中丙二醛(MDA)含量;4、苏木素-伊红染色法(HE)观察各组瘤组织的病理形态学变化;免疫组化法观察藿夏胶囊对栘植瘤瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、P53基因的影响。结果:1、MTT实验结果显示,藿夏胶囊能够抑制NCI-H460、Hep G2、SKOV-3细胞生长,且对NCI-H460细胞增殖的抑制作用比Hep G2、SKOV-3细胞强。AO-EB双染结果显示,正常对照组发绿色荧光,且细胞结构正常,活细胞生长密集;CTX组细胞量明显减少,早期凋亡细胞多,碎片多,核呈缩状,凋亡细胞被染成明亮的橘红色;不同浓度给药组活细胞量随药物浓度的增大而减少,有些细胞核呈缩状,有碎片凝集,凋亡细胞核被染成橘红色。2、NCI-H460移植瘤模型造模成功,其成瘤率为100%。与正常组相比,模型组和各给药组均明显减轻裸鼠体重(P0.01);CTX组和藿夏胶囊高剂量组与模型组相比,裸鼠体重均显著减轻(P0.01);给药后,模型组、低中高藿夏胶囊组及CTX组的抑瘤率分别为0.00%、13.0%、21.5%、43.9%、71.7%。裸鼠瘤体积分别为(3271.19±1777.70)、(2169.87±1678.50)、(1817.21±1191.77)、(1672.39±707.06)、(135.26±128.40)mm~3,瘤重分别为(2.23±0.07)、(1.94±0.36)、(1.76±0.48)、(1.25±0.61)、(0.63±0.39)g,CTX组和藿夏胶囊高剂量组瘤体积及瘤重均比模型组小(P0.01或P0.05)。3、各给药组荷瘤裸鼠的ALP、ALT、AST、UA、BUN、GLB、ALB、TP与模型组相比均无统计意义(P0.05);藿夏胶囊组的CRE与模型组相比无统计学意义(P0.05);CTX组与模型组相比有统计学意义(P0.05)。各给药组荷瘤裸鼠血清及肿瘤组织中TNF-α含量显著比模型组高(P0.01或P0.05);藿夏胶囊高剂量组及CTX组瘤裸鼠血清中IL-6水平比模型组低(P0.05),藿夏胶囊中、高剂量组及CTX组瘤组织中IL-6水平比模型组低(P0.05)。各给药组肿瘤组织中MDA含量与模型组相比显著降低(P0.01或P0.05);各给药组肿瘤组织中SOD活力比模型组显著增高(P0.01)。4、在HE染色实验中,模型组肿瘤组织中的癌细胞细胞排列紧密,生长旺盛,细胞核大;各给药组坏死细胞多,细胞核小,胞间疏松;免疫组化结果显示,各给药组瘤组织中Bax阳性表达率与模型组相比,有统计学意义(P0.05或P0.01);藿夏胶囊中、高剂量组和CTX组瘤组织中的Caspase-3阳性表达率与模型组相比,有统计学意义(P0.01)。结论:初步验证藿夏胶囊对NCI-H460、Hep G_2、SKOV-3这3种癌细胞均有抑制作用,其中对NCI-H460细胞的抑制效果要较对Hep G_2、SKOV-3细胞更显著。藿夏胶囊在体外对NCI-H460裸鼠移植瘤有抑制作用,并能够诱导细胞凋亡。其作用机制可能与清除自由基,提高TNF-α含量,抑制IL-6分泌,增加Bax、Caspase-3基因的表达有关。


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