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卵巢恶性肿瘤组织中血管内皮生长因子表达与其侵袭、转移关系的研究

王丽梅  
【摘要】: 目的:探讨血管内皮生长因子表达及肿瘤内微血管密度与卵巢恶性 肿瘤发生、发展转移的关系及其预后价值;术前血清VEGF含量的诊断价值及 其临床意义;VEGF基因表达促卵巢肿瘤血管形成的作用以及与肿瘤浸润转移 的关系。方法:1、以逆转录多聚酶链反应(reverse transcriptation polymerase chain reaction,RT-PCR)聚丙烯酰胺凝胶银染检测54例恶性肿瘤,14例良性肿瘤及16 例正常卵巢组织中VEGF mRNA及其亚型的表达;采用SABC免疫组织化学 方法检测VEGF、VEGF受体flt-1及kDR/flk-1蛋白的表达,并以F8因子(v-WF, FⅧ-RA)标记肿瘤微血管。分析VEGFmRNA及其亚型、VEGF及受体flt-1及 kDR/flk-1以及微血管密度(Microvessel density,MVD)与恶性卵巢肿瘤组织学 类型,分化程度、FIGO分期,腹水、淋巴结转移等临床病理因素的关系。采 用Kaplan-Meier/Log Rank分析和COX模型分析VEGF表达与卵巢恶性肿瘤预 后的关系。2、采用酶联免疫吸附法(ELISA)对90例健康妇女、25例卵巢良 性肿瘤及105例卵巢恶性肿瘤进行血清VEGF含量分析,并进一步对其中10 例恶性肿瘤患者进行手术治疗前后血清VEGF水平的动态观察。3.利用表达 VEGF cDNA的质粒载体P~(CMV-NEO-VEGF)进行脂质体法体外转染人类卵巢癌细 OVCAR3。利用Northern-blot及Western-blot技术鉴定转染阳性的亚克隆细胞 VEGF基因的表达。并采用体内外实验,研究VEGF基因表达对OVCAR3细 胞生长的影响以及对裸鼠成瘤及血管生成的影响。4.采用MTT法,在体外实 验条件下,研究VEGF多抗对人类卵巢癌细胞株SKOV_3生长的影响。结果: ①卵巢恶性肿瘤中VEGFmRNA及其亚型VEGF_(121)、VEGF_(165)表达阳性率显著 高于良性肿瘤及正常卵巢,相比较差异有显著性,P<0.05。而VEGF_(189)仅在恶 性肿瘤组织中表达;②卵巢恶性肿瘤中VEGF和VEGF受体flt-1、KDR/flk- 1蛋白表达阳性率明显高于良性肿瘤及正常组织,相比较差异有显著性, P<0.05;恶性组肿瘤内MVD显著高于良性及正常组;③在卵巢恶性肿瘤中, VEGFmRNA及其亚型、VEGF及其受体flt-1、kDR/flk-1表达及MVD与肿瘤 的病理学类型、分化程度、临床分期无关;大量腹水者(≥500ml)VEGF165和 m叫表达明显高于无或少量腹水卜500ml)的患者,淋巴结阳性者**G门89和 n卜1 阳性表达率明显高于淋巴结阴性者,相比较差异有显著性,P<0刀5;大网 膜转移者VEGF 65和VEGF189阳性表达率也明显高于大网膜正常者; VEGF 89、VEGF及kDRjflki表达者肿瘤内的MVD显著高于不表达者 …<O.05hMV D与卵巢恶性肿瘤肝转移有关,MV D高者容易出现肝转移。④在 卵巢恶性肿瘤中,VEGF及其受体共同表达者,预后差;VEGF 165及VEGF189 表达与恶性上皮性卵巢肿瘤的总生存期有关,表达者预后差,但COX模型综 合分析提示:VEGF基因表达不能作为一独立的预后指标。⑤恶性肿瘤术前 血清 VEGF含量显著高于良性组及正常组,以 100pghal为界值,其诊断的特 异性为87%,敏感性为刀.l%;⑤恶性肿瘤术前血清VEGF水平与临床分期、 分化程度的大小密切相关饲.05);手术治疗后血清hGF含量下降,并与恶 性程度及术后残存灶相关;术后血清VEGF含量与预后无相关。③转染阳性 克隆细胞OVNEGF稳定表达VEGF:VEGF基因对体外肿瘤细胞的生长无影 响:转染阳性的O…F可促进裸鼠肿瘤的血管生成,与肿瘤的浸润转移相 关;③VEGF抗体对人类卵巢癌细胞S KOV3的体外生长无直接影响。结论: VEGF基因表达与卵巢恶性肿瘤的发生、发展相关;VEGF165、VEGF189及 itq表达与恶性肿瘤的浸润转移有关,表达者较不表达者易发生远处转移,因 此可作为预测肿瘤转移潜能的指标:V以刃及叨历咀卜1 与卵巢肿瘤的血管生 成相关,表达者MVD丰富:血清V以亚水平可作为诊断卵巢恶性肿瘤有价值 的生物学指标:VE OF表达促进肿瘤的血管发生,**OF抗体抗肿瘤的作用,主 要是通过抑制肿瘤的血管产生效应而非直接的细胞毒作用,基于此理论,抗血 管生成治疗恶性肿瘤将会有更广阔的前景。


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