收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

抗人erbB2人/鼠嵌合抗体的构建、真核高效表达及治疗卵巢癌的实验研究

钟艳平  
【摘要】: 卵巢癌死亡率在妇科肿瘤中居首位。尽管肿瘤减灭术及以铂类为基础的联合化疗在卵巢癌的治疗中起到了积极的作用,但因缺乏有效的早期诊断方法,70%的患者初诊时即为晚期患者。手术及化疗后复发率高、易出现耐药,因而患者的5年生存率长期停留在30%左右。erbB2在相当部份的卵巢癌中有过度表达,并与患者预后不良,复发、耐药有关,开展针对erbB2抗原的免疫治疗为卵巢癌治疗提供了一种新的手段。因此,本课题首先探讨了C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的表达与卵巢恶性肿瘤发生、发展、转移及其预后价值;研制了抗erbB2人鼠嵌合抗体HZC26并进行了真核高效表达;在此基础上利用HZC26进行了治疗erbB2过表达的卵巢癌的体、内外实验研究。 C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的表达与卵巢恶性肿瘤的关系 采用SABC免疫组织化学方法检测了49例卵巢恶性肿瘤、21例良性肿瘤及19例正常卵巢肿瘤组织中C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的蛋白表达,结果显示:卵巢恶性肿瘤组织中C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4表达率显著高于良性肿瘤及正常卵巢,相比较差异有显著性(p<0.05)。在卵巢恶性肿瘤中,C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的表达与肿瘤的临床分期有关,但与病理学类型、组织分化程度无关。这些结果表明,C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的表达与卵巢恶性肿瘤的发生、发展有关。大量腹水者C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的表达明显高于无或少量腹水者,C-erbB2、C-erbB4在术后残存灶>2cm的表达明显高于无残存灶者,淋巴结阳性患者C-erbB2的表达明显高于淋巴结阴性患者。C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4在大网膜转移患者中的表达率均明显高于大网膜正常者。C-erbB2、C-erbB4在有远处转移患者中的表达率明显高于无远处转移者。提示C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的表达与恶性肿瘤的浸润转移有关。采用单因素及Cox模型综合分析证实:残存瘤的大小、C-erbB2、C-erbB4是影响卵巢癌预后的最重要的因素。 抗erbB2人鼠嵌合抗体HZC26的构建及真核高效表达 鼠单抗应用于人体治疗引起人抗鼠抗体反应,减弱或抵消其疗效,将鼠单抗改造为人/鼠嵌合抗体能降低甚至消除HAMA反应。嵌合抗体临床试用的大量研究表明,它疗效好,免疫原性与其它人源化抗体相似,而亲和力常常高于其它人源化抗体。因此,本研究采 用基因工程技术将鼠单抗改造为人鼠嵌合抗体。应用RT-PCR的方法 扩增鼠单抗ZC26的轻、重链可变区基因,克隆入含有人轻、重链恒 定区完整基因组序列和弱化启动子驱动的选择标志基因的真核高效 表达载体中。经核昔酸序列测定鉴定鼠单抗氨基酸序列正确后,转 染CHO-dhfr“细胞后经G418筛选、亚克隆和数轮的MTX加压、亚克 隆筛选获得稳定、高产量表达抗erbBZ 人鼠嵌合抗体的细胞株 CHO-HZC26,目前在 IX 10-’mollL的 MTX力压的条件下,抗体产 量已达120ug/m!。 抗erbBZ人鼠嵌合抗体HZC26治疗 卵巢癌的实验研究 将嵌合抗体HZC26纯化后,经直接ELISA、竞争抑制ELISA、 细胞ELISA、RTICR、Western七lot等方法证实,本研究所高效表达 的嵌合抗体HZC26确实为可与erbBZ特异结合,并具有人IgGI抗体轻、 重链恒定区的抗erbBZ嵌合抗体。体外实验表明:HZC26可特异的抑制 erbBZ过表达的卵巢癌细胞SKOV3 的增殖,同时利用流式细胞仪研 究了HZC26对SKOV3细胞周期的作用,发现HZC26可以导致SKOV3 细胞的GI期阻滞。在体外与顺铂联合应用对卵巢癌细胞增殖的抑制 具有协同作用,与阿霉素则产生相加效应。应用HZC26嵌合抗体对 人卵巢癌裸鼠移植瘤的体内治疗实验显示:HZC26在体内也具有抑制 卵巢癌细胞增殖的作用,与顺铂联合应用可显著提高)l匝铂的抑瘤效 果,对顺铂化疗具有增敏作用。 综上所述:本研究证实了C-erbBZ、C-erbB4均可作为卵巢癌的独 立预后因素,成功构建并在真核细胞中高效表达了抗erbBZ人鼠嵌合 抗体,体内外实验证该嵌合抗体可特异的抑制erbBZ过表达的卵巢癌 细胞SKOV3 的增殖并对顺铂化疗具有增敏作用。有望为我国治疗卵 巢癌提供一种新的有效的手段和药物。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 郑伟达;郑东海;郑伟鸿;;卵巢癌中医治疗体会[J];世界中医药;2011年04期
2 邱梅婷;秦松树;;肿瘤标志物在卵巢癌中的价值[J];中国医药导报;2011年24期
3 郝悦;张新;;中医药治疗卵巢癌研究进展[J];实用中医内科杂志;2011年07期
4 臧荣余;;晚期卵巢癌外科治疗中的过度与不足[J];中国实用妇科与产科杂志;2011年07期
5 袁志敏;;激素治疗与卵巢癌风险间关系[J];国际老年医学杂志;2010年02期
6 朱皓皞;于晓红;;卵巢癌预后评估相关因素的研究进展[J];实用癌症杂志;2011年04期
7 郝敏;;卵巢癌过度化疗因素分析[J];中国实用妇科与产科杂志;2011年07期
8 武春梅;徐丽萍;杜叶平;;CA125 CA199联合检测对卵巢癌卵巢囊肿患者的作用[J];实用医技杂志;2011年08期
9 张淑梅;;卵巢癌患者社会支持及遵医行为调查分析[J];齐齐哈尔医学院学报;2011年13期
10 熊显红;邓明静;;浅谈卵巢癌患者的术后护理[J];中外医学研究;2011年21期
11 张莹莹;宋静;朱琼;赵琳玉;高向阳;韩正祥;杜秀平;;卵巢原发性鳞状细胞癌1例[J];中国医药科学;2011年17期
12 王瑾;;三种肿瘤标志物联合检测在卵巢癌诊断中的实用价值[J];中国煤炭工业医学杂志;2011年07期
13 丁月红;;卵巢癌腹腔化疗及腹腔置管的临床分析[J];中外医疗;2011年23期
14 李红英;;卵巢癌患者护理体会[J];临床合理用药杂志;2011年30期
15 徐晓宏;张伟;王立新;;β2-微球蛋白检测与卵巢癌相关性的研究[J];中国实验诊断学;2011年08期
16 张丹妮;张秋慧;李海梅;;VEGF及MMP-9在卵巢癌中的表达及意义[J];中国实验诊断学;2011年08期
17 闫小艳;马丽君;李际春;;CT联合超声与CA125检测在卵巢癌诊断中的应用价值[J];宁夏医学杂志;2011年07期
18 易韬;綦小蓉;;骨桥蛋白RNA干扰对人卵巢癌SKOV3细胞作用的研究[J];四川解剖学杂志;2011年02期
19 彭霞;赖月容;覃惠英;;卵巢癌化疗患者生命质量与希望水平的相关性分析[J];现代临床护理;2011年08期
20 王慧香;翟建军;王蕾;侯丽娟;孙燕;;卵巢癌顺铂耐药细胞模型中14-3-3蛋白的差异表达[J];中国实用妇科与产科杂志;2011年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 程娇影;卞美璐;;激素替代治疗与卵巢癌的关系[A];第二次全国绝经相关问题高级学术研讨会论文集[C];2006年
2 王欢;林蓓;张淑兰;;卵巢上皮性肿瘤组织中核转录因子E2F3蛋白表达的研究[A];东北三省第四届妇产科学术会议论文汇编[C];2008年
3 冯勤梅;吴霞;施君;王颖;葛海良;狄文;;卵巢癌患者化疗前后免疫细胞格局变化[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
4 王凯;黄耀球;;卵巢癌病人生活质量调查与分析[A];全国社区护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2003年
5 张超;崔恒;冯捷;昌晓红;付天云;叶雪;李艺;祝洪澜;魏丽惠;;卵巢癌单克隆抗抗独特型抗体(6B11Ab3)的制备及其特性初步研究[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年
6 林莺莺;陈燕;;血清HE4和CA125检测与卵巢癌临床诊断的相关性研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
7 张衍丽;;卵巢癌介入放射化疗18例[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编[C];2001年
8 沈丹华;张雅贤;虞有智;王颖;;卵巢交界性肿瘤及卵巢癌中ING1肿瘤抑制基因的表达与甲基化研究[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
9 王波;洪凡真;李晓明;刘宗石;;上皮性卵巢癌中p73基因甲基化及1p36.33杂合性丢失[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
10 梅丽萍;;卵巢癌患者手术前后血清铜含量变化探讨[A];2004年浙江省检验医学学术会议论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田爽;去甲肾上腺素促进卵巢癌生长和血管化的分子机制以及使用PTD4-t4EBP2逆转化疗抵抗的实验研究[D];第四军医大学;2009年
2 阴梅云;阿克拉霉素与顺铂合用对卵巢癌细胞抑制机理研究[D];河北医科大学;2003年
3 杨红;CD147分子在卵巢癌的表达及其反义核酸抑制肿瘤侵袭作用的初步研究[D];第四军医大学;2002年
4 郑刚;α1,4半乳糖糖基转移酶反义寡脱氧核苷酸治疗卵巢癌的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
5 王萍玲;靶向H-ras基因的小干扰性RNA联合能量可控陡脉冲治疗卵巢癌的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
6 王红静;非甾体类抗炎药Celecoxib对卵巢癌生长抑制作用的研究[D];四川大学;2005年
7 陈雄;携带内皮抑素基因增殖型腺病毒治疗卵巢癌的实验研究[D];第二军医大学;2006年
8 杨志宏;超声波对人卵巢癌细胞COC1抑制作用及机制研究[D];重庆医科大学;2004年
9 夏志军;转移抑制基因Kail/CD82、ME491/CD63与integrinα5基因在卵巢癌浸润转移中作用及相关性研究[D];中国医科大学;2005年
10 孙平;血管抑素基因转染及联合化疗治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的实验研究[D];山东大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 钟艳平;抗人erbB2人/鼠嵌合抗体的构建、真核高效表达及治疗卵巢癌的实验研究[D];广西医科大学;2002年
2 王妍平;E-cad及其相关蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义的研究[D];天津医科大学;2002年
3 席勇;核糖核酸酶抑制因子(RI)对卵巢癌裸鼠移植瘤抑制作用研究[D];大连医科大学;2007年
4 徐小仙;卵巢癌治疗后发生第二原发癌4例分析[D];浙江大学;2007年
5 孙忠慧;中药鸦胆子油静脉乳剂对卵巢癌细胞株CAOV3作用的实验研究[D];辽宁中医学院;2002年
6 陈星;卵巢癌腹腔化疗的系统评价[D];山东大学;2005年
7 曾荔苹;白细胞介素-6作为卵巢癌诊断和预后判定肿瘤标记物的评价[D];汕头大学;2005年
8 陈旭锋;腹腔镜在卵巢癌二次探查术中的应用及价值[D];浙江大学;2007年
9 伍丹丹;新辅助化疗对晚期卵巢浆乳癌组织PI3K、P-AKT、PTEN表达的影响及临床意义探讨[D];中国医科大学;2008年
10 林淑鑫;MUC1、CA125、CA199与卵巢上皮性肿瘤关系的研究[D];福建医科大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 深秋;腹部“发福” 当心卵巢癌[N];大众卫生报;2003年
2 王建;卵巢癌难治原因和有效疗法被发现[N];中国劳动保障报;2004年
3 沈施德(教授);卵巢癌的信号[N];上海中医药报;2002年
4 安康 周应芳 晓明 应芸 李晓宏 文佩;您对卵巢癌了解多少[N];卫生与生活报;2003年
5 马瑜鸿;卵巢癌之战初见曙光[N];中国医药报;2003年
6 记者 任海军;卵巢癌为何常常复活?生死命悬一基因[N];新华每日电讯;2009年
7 任海军;美找到卵巢癌易复发原因[N];大众卫生报;2009年
8 湘雅医院 李惠明;高钙食物可防卵巢癌[N];大众卫生报;2009年
9 杜恩;当心!卵巢癌发病隐匿[N];大众卫生报;2009年
10 健康时报特约记者 生星;卵巢癌可致腹胀腹泻[N];健康时报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978