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间断压力对体外培养成人骨髓基质细胞的作用研究

胡小毅  
【摘要】: 目的:骨组织工程目前尚未能广泛地应用于临床,主要原因是各项研究内容实验依据尚不充分,大多停留在动物实验阶段。本实验借鉴前人的研究成果,取成人的骨髓液分离纯化得骨髓基质细胞进行体外培养,并对细胞施加间断气体压力,观察细胞在加压后的增殖及分化情况,以获得更多种子细胞,为骨组织工程学研究内容提供更多实验室依据,从而促进骨组织工程应用于临床。 材料与方法:取无骨髓疾病患者骨髓经分离纯化后得骨髓基质细胞,将细胞分为细胞检测组和原代压力实验和传代压力实验组。(1)细胞检测组:细胞接种于6孔板,用含有诱导因子的培养液培养。通过倒置显微镜和HE染色观察细胞大体形态;通过扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构;通过碱性磷酸酶染色、钙结节染色对细胞定性。另设对照组不加诱导因子,其余条件与实验组相同。(2)原代压力实验组:将细胞接种于96孔板内,在原代培养72Hour时将培养板以封口膜封闭后置于压力装置内,每天施加压力8小时,压力大小为0.098Mpa,按照加压15分钟→放压15分钟→加压15分钟的顺序,连续9天。另设对照组不加压力,其余培养条件与实验组相同。分别在加压的第3、6、9天进行细胞计数和ALP含量检测。(3)传代压力实验组:原代接种细胞经过常规培养和多次传代,细胞生长停滞或明显减慢时检测ALP(-),按照原代压力实验组压力条件进行加压,检测ALP。另设对照组,除不加压力外,其余条件同实验组。 结果:(1)骨髓基质细胞在体外培养可以自然转化或经诱导转化为成骨细胞,经过诱导的细胞比自然分化的细胞较早出现分化。(2)施加间断压力的骨髓基质细胞和对照组相比其增殖、分化速度快,经统计学分析该差别有统计学意义。随着加压时间延长,两组增殖、分化速度无明显差别。(3)衰老退化的骨髓基质细胞在间断压力作用下没有增殖和分化的明显改变。 结论:(l)骨髓基质细胞是一种具有.多向分化潜能的干细胞,在体外培养可 以分化为成骨细胞。(2)合理的体外培养和适当的生物外力可以促进离体培 养的成人骨髓基质细胞的增殖和分化。(3)间断压力对衰老退化的骨髓基质 细胞增殖和分化没有明显作用。


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