癌—睾丸抗原OY-TES-1基因重组、表达及抗体血清学分析

【摘要】： 目的:初步了解OY-TES-1在各种组织的表达及其抗体出现的情况,分析OY-TES-1与肿瘤发生发展以及其抗体与肿瘤和其它疾病的关联,探讨将OY-TES-1用于肿瘤免疫治疗的可能性。 方法:(1)RT-PCR扩增OY-TES-1cDNA序列,构建OY-TES-1原核重组表达质粒,表达和纯化OY-TES-1融合蛋白;(2)对OY-TES-1进行生物信息学分析;(3)制备OY-TES-1多克隆抗体;(4)利用实时定量PCR(qRT-PCR)和免疫组织化学(IHC)技术,从mRNA和蛋白质两个水平研究OY-TES-1的基因表达特点;(5)采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同肿瘤、肝硬化、不育症病人及正常人血清中相应的抗体,并对其临床意义做初步的分析。 结果:(1)通过大肠杆菌成功表达出融合蛋白麦芽糖结合蛋白/OY-TES-1(MBP/OY-TES-1),对表达的蛋白行蛋白质飞行质谱仪鉴定,确定与目的蛋白肽段相符。(2)OY-TES-1mRNA在正常组织中广泛表达,以睾丸组织中OY-TES-1的相对表达量最高,约为其他正常组织90倍以上;在HCC、脑膜瘤和胶质瘤中,OY-TES-1mRNA表达水平明显高于癌旁组织和对应的正常组织,并与肿瘤临床指标无关。(3)免疫组织化学(IHC)显示在所检测的多种正常组织和细胞中(10例睾丸组织、8例结肠、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶状体、3例外周血白细胞和1例肾),除1例肾组织中的肾小管外,其余均未见OY-TES-1蛋白阳性反应;在非肿瘤病变组织中,1例前列腺炎与2例慢性乙型肝炎均为阴性,4例HCC癌旁的肝硬化组织有1例阳性,50%(4/8)不育症病人睾丸组织呈现OY-TES-1蛋白阳性反应。HCC、结肠癌和胃癌中OY-TES-1蛋白阳性率分别为40%(4/10)、33.3%(1/3)和25%(4/16),而7例肺癌组织均为阴性反应。(4)血清学检测未发现76例正常人和17例肝硬化病人血清中有相应抗体;肿瘤病人血清抗体阳性率为14.9%(56/377),其中食管癌为30%(3/10),HCC为20%(12/58);不育症病人血清抗体阳性率高达70.8%(46/65),并有较高的抗体滴度,统计学分析显示OY-TES-1抗体血清学检测用于诊断不育症有显著意义(P＜0.05)。 结论:OY-TES-1是一种限制性表达于正常组织、选择性高表达于肿瘤组织的抗原,属于癌睾丸相关抗原,有望成为用于肿瘤免疫治疗的靶抗原;OY-TES-1抗体的出现与不育症的关系需作深入的研究。