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不同葡萄糖浓度条件下茶多酚对NIT-1细胞内活性氧干预的研究

金静  
【摘要】: 目的研究不同葡萄糖浓度对NIT-1细胞产生活性氧的影响,以及茶多酚对其的干预作用。 方法1、CCK-8实验检测茶多酚对NIT-1细胞增殖活性的影响。2、将NIT-1细胞置于低高两种浓度葡萄糖培养以及高糖加用两种浓度茶多酚干预的基础上将其分组如下:NG组(葡萄糖5.6mmol/L培养48h);HG组(葡萄糖25mmol/L培养48h);HG1组(葡萄糖25mmol/L+1μg/ml茶多酚培养48h);HG5组(葡萄糖25mmol/L+5μg/ml茶多酚培养48h)。干预后用流式细胞仪检测各组细胞内ROS水平的改变—荧光探针(2’,7’-二氯荧光乙酰乙酸盐,2’,7’-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)染色。3、将NIT-1细胞置于不同浓度葡萄糖培养以及是否加用茶多酚干预的基础上将其分组如下:NG组(葡萄糖5.6mmol/L培养48h)、NG+T组(葡萄糖5.6mmol/L+5μg/ml茶多酚培养48h);MG组(葡萄糖16.7mmol/L培养48h)、MG+T组(葡萄糖16.7mmol/L+5μg/ml茶多酚培养48h);HG组(葡萄糖25mmol/L培养48h)、HG+T组(葡萄糖25mmol/L+5μg/ml茶多酚培养48h)。4、流式细胞仪检测各组细胞内ROS水平的改变。5、体外胰岛素刺激释放(GSIS)实验,放免法检测胰岛素水平。 结果1、CCK-8实验发现当茶多酚浓度为1和5μg/ml时,对NIT-1细胞的增殖活性无显著影响。2、与HG组比,NG组、HG5组ROS表达均显著降低(P0.05),HG1组ROS表达无明显差异(P0.05)。3、与NG组相比,MG组、HG组ROS表达均显著升高(P0.05);HG组ROS表达量明显高于MG组(P0.05);与NG+T组相比,MG+T组、HG+T组ROS表达均显著升高(P0.05);HG+T组ROS表达量明显高于MG+T组(P0.05);NG组的ROS表达水平与NG+T组相比无明显差异(P0.05);MG+T组的ROS表达比MG组的表达下降(P0.05);HG+T组的ROS表达比HG组的表达下降(P0.05)。4、与NG组相比,MG组、HG组胰岛素分泌量均显著降低(P0.05);HG组胰岛素分泌量明显低于MG组(P0.05);与NG+T组相比,MG+T组、HG+T组胰岛素分泌量均显著降低(P0.05);HG+T组胰岛素分泌量明显低于MG+T组(P0.05);同一葡萄糖浓度组的葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,无论有无茶多酚干预,其胰岛素分泌量无明显差异(P0.05)。 结论1、1μg/ml和5μg/ml的茶多酚对NIT-1细胞无毒性。2、NIT-1细胞内ROS产生与葡萄糖浓度呈剂量依赖性。3、5μg/ml茶多酚可降低高糖所致的NIT-1细胞内的ROS表达,证实了该浓度茶多酚可减轻高糖对NIT-1细胞所致的氧化损伤。4、5μg/ml茶多酚对高糖所致的NIT-1细胞的胰岛素分泌功能的抑制无显著影响,说明此浓度的茶多酚不能恢复或者改善NIT-1细胞受损的胰岛素分泌功能。


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