氨基酸和多巴对映体的毛细管电泳手性拆分新体系研究

【摘要】：长期以来,人们一直认为L-氨基酸是生物体内唯一的氨基酸存在形式,但是近年来许多研究发现,在人和动物体内存在着多种D- 氨基酸,并已证明部分D- 氨基酸是在细胞中直接生物合成,且生物体内的D- 氨基酸具有某种重要的生理功能。因此,氨基酸的手性拆分和检测在生命起源、发育、病变及衰老研究中,均具有重要的意义。左旋多巴是目前治疗帕金森病的有效、常用药物。但D-多巴对人体具有毒性。左旋多巴中D-多巴含量过多,病人服用后会产生副作用乃至造成生命危险。因此,多巴的手性拆分及左旋多巴光学纯度的检验在临床医学上具有重要的意义。 本论文探索了氨基酸对映体的高效毛细管电泳分离分析的新体系,研究了氨基酸与手性选择剂、胶束准固定相的相互作用机理,建立了四个氨基酸对映体分离新体系。此外,还建立了左旋多巴光学纯度检验的新方法。论文的主要内容如下: 1. 考察了NBD-Cl衍生氨基酸的影响因素。以α-CD、β-CD、HP-β-CD、γ-CD为手性选择剂,考察了它们对NBD-氨基酸手性分离的影响。结果发现β-CD和 HP-β-CD对NBD-氨基酸具有拆分能力,且HP-β-CD的拆分能力强于β-CD的拆分能力。该法在9min内同时拆分了7种混和氨基酸对映体,一共拆分了14种氨基酸对映体。 2. 将价廉易得的2,4-二硝基氟苯用于氨基酸柱前衍生,把负电性羧甲基-β-环糊精添加到背景电解质中,研究了负电性手性选择剂手性拆分氨基酸的作用机理,分别拆分了7 种混合氨基酸对映体和5 种混合氨基酸对映体,一共拆分了16 种氨基酸对映体。 3. 以HP-α-CD作为手性选择剂,利用毛细管区带电泳技术,不仅使苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸对映体得到完全手性拆分,而且使3种氨基酸混和物也达到了完全分离。 WP=6 4. 探索了新型胺类手性衍生试剂-脱氢松香酸酰氯与氨基酸的衍生反应。探讨了氨基酸衍生物与十二烷基硫酸钠作用机理,在仅含25mmol/L十二烷基硫酸钠的胶束电动色谱中快速实现了氨基酸的手性消除分离。 5. 建立了多巴手性分离新体系,并应用于左旋多巴光学纯度检测。 D-多巴含量在0.1~2.0%范围内具有良好的线性关系(R2=0.9990),并测定左旋多巴的光学杂质为0.2%。