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以偶氮胂(羧)金属配合物为光谱探针测定蛋白质的研究

石展望  
【摘要】:蛋白质是生物体内最重要的物质之一,是生命的基础。蛋白质的定量分析既是生物化学、药学和其它生物学科中经常涉及的分析内容,也是临床检验中疾病诊断及检验疾病治疗效果的重要指标。而且,蛋白质的定量分析,还是许多生化药物分离提纯的质量控制和食品检验的常规分析项目。因此,建立快速、准确、高灵敏的蛋白质定量分析方法具有重要的理论和现实意义。本文对偶氮胂(羧)金属配合物与蛋白质的结合反应进行了详细的研究,建立了五种高灵敏的测定蛋白质含量的新方法。直接应用于生物样品分析,获得了满意的结果。主要研究工作如下: 1. 详细考察了偶氮胂III-钇(III)在pH 2.3~2.5 的Briton-Robinson 缓冲介质中与蛋白质的作用,建立了以偶氮胂III-钇(III)为光谱探针,分光光度测定蛋白质含量的新方法。该法线性关系好,灵敏度高。以人血清白蛋白(HSA)为例,浓度在0~20 mg/L 范围内与配合物最大吸收波长(652 nm) 处的吸光度降低值成正比,相关系数r=0.9999,表观摩尔吸光系数ε_(652)= 2.60×10~mol~(-1)·cm~(-1)。生物体内常见物质基本不干扰测定。应用于人血清样品中蛋白质总量的测定,结果满意。 2. 将对乙酰基偶氮胂金属配合物用于蛋白质分析,建立了以对乙酰基偶氮胂-钇(III)为光谱探针测定蛋白质含量的新方法。当以配合物的最大吸收波长(653 nm)为检测波长时,蛋白质(以HSA 为例)的浓度在0~20 mg/L 范围内与配合物吸光度的降低值呈现良好的线性关系, 表观摩尔吸光系数ε_(653)=1.98×10~6 L·mol~(-1)·cm~(-1)。该法简便,快速,灵敏度高,抗干扰能力强。成功应用于人血清样品中蛋白质总量的测定。 3. 首次研究了β型金属配合物与蛋白质的结合反应。在pH 0.75~1.5的HCl—NaAc 缓冲介质中,β型金属配合物偶氮硝羧-钡(II)能与蛋白质在室温下7 min 内反应完全。基于此,建立了以偶氮硝羧-钡(II)β型配合物为光谱探针的快速、灵敏测定蛋白质含量的分光光度新方法。该方法对HSA 的表观摩尔


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