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中药体外毒性试验及其毛细管电泳研究

张桂华  
【摘要】:中药为中国传统中医特有药物,中药及中成药疗效不但经受住了长期医疗实践的检验,而且也已被现代科学研究所证实,很多中草药的有效成分、分子结构、药理、毒理等也已经全部或部分地研究清楚。但由于历史条件限制,许多常用中药或中成药没有经过严格的毒性测试与危险评估。对中药或中成药的毒性认识从临床现象上了解较多,而其本质、机制了解较少;对短期能够发现的急性毒性了解较多,而对长期使用后可能对器官组织产生的隐匿毒性或产生器质性损伤的潜在可能性了解较少。随着遗传毒理学的发展,人们对中药的遗传毒性进行了大量研究,为中医药安全应用提供了科学依据。 本研究选用人肝癌HepG2作为试验系统,研究了中药的急性毒性及遗传毒性,并利用现代分析测试技术—高效毛细管电泳(HPCE)对经毒性实验初步筛选出来的中药中的有效成分进行二次筛选,为评估中药对人类健康危害提供实验资料。 1、采用中性红试验对可能对人肝癌HepG2细胞具有一定遗传毒性的山慈菇、射干、吴茱萸、贯众、白附子、土荆皮、川乌、苦杏仁、威灵仙、蛇床子、草乌、苍耳子、重楼、姜水半夏、花椒、两面针、仙茅、天南星、土鳖虫、牵牛子、水蛭、马钱子、全蝎等23种中药初步进行急性毒性筛选,并用单细胞凝胶电泳试验对筛选出来的其中2味中药的遗传毒性进行评估。 2、采用超声波法提取射干中的异黄酮类化合物和吴茱萸中的生物碱类化合物。射干中的异黄酮类化合物最佳提取条件为溶剂甲醇用量75mL,提取时间120min,超声波功率100W,浸泡12h超声,在该条件下,射干中异黄酮的含量为37.7mg/g;吴茱萸中的生物碱类化合物最佳提取条件为溶剂甲醇用量75mL,提取时间120min,超声波功率100W,浸泡12h超声,在该条件下,吴茱萸中总生物碱的提取率为2.99%。 3、建立了毛细管电泳-紫外检测法分离分析射干中射干苷和鸢尾黄素的方法。研究了运行缓冲体系的种类、浓度、缓冲体系pH值、分离电压、进样时间等因素对分离射干中射干苷和鸢尾黄素分离检测的影响。实验结果表明,在检测波长265nm下以20.0 mmol/L硼酸盐(pH=9.0)为缓冲液,分离电压20 kV,进样时间15s,异黄酮类化合物射干苷和鸢尾黄素能够得到较好的分离。 4、建立了毛细管电泳安培检测法测定吴茱萸药材中吴茱萸次碱的方法,在优化条件后,选择5.0mmol/L(pH9.5)的硼砂缓冲体系,分离电压15 kV,电动进样8 s,吴茱萸次碱得到良好分离。该方法简单、快速、灵敏度高、重现性好、可靠。 5、建立了毛细管电泳电导检测法测定吴茱萸药材中吴茱萸次碱的方法。研究了测定吴茱萸次碱的缓冲体系及其浓度、pH值、工作电压以及进样高度。结果表明,最佳检测条件为:以4.0mmol/L硼砂+硼酸(pH=8.9 );分离电压为30kv;进样时间:15 s;进样高度:18 cm。在此工作条件下,吴茱萸次碱的回收率为93.4%~102.4%。


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