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2011-2012年间IBDV的分离鉴定及不同基因型IBDV流行株的抗原性研究

杨霖  
【摘要】:传染性法氏囊病(infectious bursal disease, IBD)是雏鸡的一种急性传染病,其病原鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)可侵害鸡的B前淋巴细胞而引起鸡群的免疫抑制,随着近年我国IBDV超强毒株,变异毒株甚至重组毒株不断出现,再加上不同毒株间血清亚型的多样性,传染性法氏囊病的流行性表现出了死亡率高,突破免疫能力增强的新特点。因此,及时分离并筛选具有代表性的地方流行毒株作为研制疫苗的候选毒株,并对其抗原性进行研究就成为一项十分有意义而且非常必需的工作。 研究首先对2011~2012年间分别来自广西、浙江2个省的IBD疑似病例通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种SPF鸡胚的方法从可疑鸡群的法氏囊样品中分离获得了20株鸡传染性法氏囊病病毒,并对分离株的VP2基因高变区(vVP2)序列进行扩增和序列测定,通过vVP2序列中关键氨基酸位点的比较和序列的遗传进化分析表明,分离株QX110603具有222-P、279-N、284-T、299-N的cIBDV特征氨基酸位点,与弱毒株的同源性较高(98.1%~98.7%),同时与弱毒株在进化树上亲缘关系较近;YY1195,QX110606等19个分离株具有222-A、249-Q、254-G、256-I、279-D、284-A、294-I和299-S的vvIBDV的特征氨基酸位点,与超强毒株的同源性较高(95.7%~100%),在进化树上与超强毒株分在一个大支。此外,这些分离株大多具有212位氨基酸由D变成N的突变,这一突变发生在第一亲水区,可能引起毒株亲水性的改变从而影响病毒的抗原性,由于这些毒株都分离自接种过疫苗的鸡场因此推断部分毒株可能已经发生了抗原漂移。血清中和试验表明,20个分离株与HUN0801、B87和TSC-1(3)等同属于一个血清亚型。 第二,将前期研究获得的4个不同基因型流行株分别人工感染4周龄本地商品非免疫鸡,以比较不同基因型分离株对本地商品鸡的致病性。试验从致死率、免疫器官指数(immune organs index,IOI)、免疫细胞含量和靶器官中病毒载量几方面分别进行评价,结果显示,四个毒株对试验鸡的发病率均为100%;各实验组与对照组在以上4个评价指标中均表现差异显著(p0.05),表明不同IBDV分离毒株对本地商品鸡具有一定程度致病性,其中NN1172对本地商品鸡的致死率最高(30%),其感染的法氏囊和胸腺组织中的IBDV拷贝数最多,分别为(13.63±0.44)*103拷贝数/μL和(14.07±0.38)*103拷贝数/μL,法氏囊与胸腺组织中的淋巴细胞含量与对照组之间差异最显著,表明,NN1172对本地商品鸡的致病性最强。 第三,通过制备四个分离株的单价灭活油乳剂疫苗(OEV)以及商品疫苗毒株B87(in)的OEV,分别对4个分离株进行免疫交叉保护试验以及B87(in) OEV对这4个不同基因型毒株的保护试验。试验分别从攻毒后各毒株OEV免疫组鸡的IOI、免疫保护指数(immuneprotection index,IPI)、免疫细胞含量和相应组织中病毒载量进行评价。结果显示,B87(in)OEV对四个分离株NN1172、NN1005、GD10111、JS7的IPI分别为60%、70%、70%、80%,说明商品疫苗B87(in)不能对地方流行毒株提供完全的保护;四个单价OEV对同源毒株均可产生100%保护,NN1172的OEV对NN1005、GD10111、JS7的IPI分别为80%、80%、90%,交叉免疫保护性最好,其它三个OEV免疫组在不同毒株攻毒后的IPI则在50%~80%之间;此外,NN1172的OEV免疫组在不同毒株攻毒后的IOI、法氏囊与胸腺组织中的淋巴细胞含量和IBDV载量等3个评价指标上与对照组差异最不明显。因此表明,NN1172OEV的保护率最高,其抗原性最好,可以作为研制预防IBD用的OEV的备选疫苗株。 综上所述,vvIBDV仍然是2011-2012年间的主要流行毒株;在4个不同基因型流行代表株中,NN1172对本地商品鸡的致病型最强,其免疫保护性也最好,可以作为研制预防IBD用的OEV的备选疫苗株。


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