收藏本站
收藏 | 论文排版

珍稀濒危植物珙桐(Davidia involucrata)苞片差异表达基因的克隆与分析

黎云祥  
【摘要】: 珙桐生活史中较独特的发育事件是其较小的头状花序下形成的2~3个大型苞片。一般认为,苞片是叶片的变态或自叶片演化而来。然而自1869年珙桐被发现以来,未见关于珙桐苞片在该物种进化生物学、生殖生态学及其生活史中的作用和地位的报道。该物种是研究植物苞片发育的分子机理及探讨苞片与叶片发育的相互关系的理想材料,也是探讨苞片在植物生殖生物学及生殖生态学中作用和功能的理想材料。 本研究利用新近发展的抑制性差减杂交技术(SSH)成功构建了珙桐幼嫩苞片和叶片差减文库。共分析了237个克隆的插入片段,其大小介与100到2000bp之间。用正向扣除产物和反向扣除产物作探针分别与237个克隆的插入片段PCR产物杂交,结果表明有167个克隆代表了只在苞片中表达或在苞片中表达量增加的基因。用地高辛标记的珙桐苞片、叶片和根的cDNA做探针,与差减杂交所获得克隆的PCR产物的杂交结果表明,有少数基因在这些器官中都是大量表达,而大多数在这些器官里的表达量均很少,除苞片外,一般均检测不到,有部分基因在苞片中优势表达。 随机挑选了16个差异表达的克隆进行序列测定,经与GenBank数据库相关数据比较分析,发现有2个新的cDNA片段(ETS),有12序列与GenBank中已知蛋白或推测蛋白质(putative protein)序列有高低不同的同源性,它们参与基因的表达调控、植物的次生代谢、信号传导、抗逆、应激及防御反应等细胞生命活动过程。另外还有2个序列与数据库中已存在的未知蛋白质同源。这些 四川大学博士学位论文 基因片段在抑制性差减杂交前后的量均有较大的变化,即差减扣除后被大大富 集了。 分析本试验获得的烘桐苞片差异表达的有限几个部分或全长序列的cDNA 发现:*)处于生长发育初期的苞片中有一些较为独特的基因表达。如PIB4基 因编码的葡萄糖昔酶、PIAS基因编码的植物脂肪转移蛋白、PZD4基因编码的 一种富含脯氨酸的蛋白都有参与植物的抗逆、防御或应激反应的功能八2)幼嫩 苞片中有互为桔抗作用的基因同期表达。如编码脱落酸诱导或成熟过程中表达 蛋白的PIF4基因与编码植物生长素响应蛋白的.PIHll基因都同期在苞片中优 势表达。 通过抑制性差减杂交的到克隆PIAS,反向NOrthern杂交表明它在玖桐苞片 中优势表达,即在苞片中的表达水平远远超过在处于同时期的叶片中的表达水 平。RTPCR结果证明它在苞片中强烈表达而在处于同时期的叶片中几乎检测不 到其表达。对得到的该片段分析表明,它是一种脂肪转移蛋白(LTP)基因的部分 序列。采用 5’-端 RACE技术获得了该基因的全长 CDNA序列* N。其推测 的氨基酸序列与GenBank中注册的LTP蛋白前体的同源性达63%,且具有植物 Lh蛋白共同特征,如8个保守的半肌氨酸位点,较高的等电点oI==8.9似及缺 少色氨酸等。推测的氨基酸序列具有两个显著的跨膜螺旋:第一个螺旋位于第5 个(Gly和第35个仰)氨基酸之间,第二个螺旋位于第28(Alg和第46队eul个氨 基酸之间。推测的最可能的信号肽切割位点位于第28(Alal和29(Alal个氨基酸之 间。椎测的成熟肽共有92个氨基酸,分子量9.ZkDa。上述所有证据表明,我们 克隆到一个烘桐苞片优势表达的脂肪转移蛋白基因NsLTP。构建T PI AS和 poE30的重组质粒,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,Westhe杂交证实PIAS 在大肠杆菌中得到了表达。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 方鼎,罗献瑞,唐恢天;广西爵床科植物新资料[J];广西植物;1997年01期
2 郑兴峰,张玄兵;植物教材中一些缺少详解名词的浅释[J];华南热带农业大学学报;1996年01期
3 苏志云;中国紫堇属(Corydalis Vent.)尖突紫堇组(Sect.Mucroniferae Fedde)的分类和分布[J];云南植物研究;1980年02期
4 杨斧;;苞片变态更精彩[J];大自然探索;2008年09期
5 王文采;中国唇柱苣苔属校订(Ⅰ)[J];植物研究;1985年02期
6 陈之端,邢树平,梁汉兴,路安民;鹅耳枥和虎榛子(桦木科)雌性生殖器官的形态发生[J];植物学报;2001年11期
7 关乃奇;;似花非花实苞片[J];生命世界;1984年03期
8 丘华兴;中国血桐属植物资料[J];广西植物;1982年03期
9 吴征镒,庄璇;中国紫堇属曲花紫堇组的研究[J];云南植物研究;1984年03期
10 王家训;工厂大气混合污染对含笑(Michelia figo(Lour)Spreng)叶片、花的影响[J];华中师范大学学报(自然科学版);1992年03期
11 王文采;;楼梯草属苞片形态和演化趋势[J];广西植物;2010年05期
12 马三梅;林文乐;杨维东;;大花美人蕉花发育过程中气孔密度和气孔指数的动态变化[J];热带亚热带植物学报;2010年05期
13 ;大麻科[J];云南植物研究;1977年01期
14 张宏达,叶创兴;山茶科的系统发育诠析——Ⅱ.金花茶的分类特征[J];中山大学学报(自然科学版);1993年03期
15 徐彬;王广东;郭维明;文方德;;花烛苞片离体培养及植株再生(简报)[J];亚热带植物科学;2007年04期
16 廉彭彭;周桂玲;;NaCl胁迫对疣苞滨藜种子萌发和早期幼苗生长的影响[J];西北植物学报;2008年12期
17 方振富;东北杨柳科新分类群[J];植物研究;1984年01期
18 张秀伏;《中国沙漠植物志》柳属(SalixL.)增订[J];中国沙漠;1995年03期
19 铁军,金山,白海艳,吴志萍;六种芦荟属(Aloe L.)植物的形态特征及生物学特性描述[J];晋东南师范专科学校学报;2004年05期
20 鲁德全;中国石竹属的分类、演化和分布[J];植物研究;1995年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 俞菊;张丽华;李生强;朱金燕;刘伟;梁国华;;盆栽一品红糖代谢的生理及分子基础的初步研究[A];江苏省遗传学会植物分子育种学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
2 周国林;黄兴学;邓耀华;王斌才;杜凤珍;姚芳;胡侦华;;两个朝鲜蓟品种引种栽培观察[A];湖北省植物生理学会第十五次学术研讨会论文集[C];2007年
3 林有润;;广东植物志第八卷菊科补遗[A];广东省植物学会第十七期学术研讨会论文集[C];2008年
4 沈鹏;兰丽婷;冯玉兰;董丽;;大苞萱草形态性状的表型分析[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
5 刘子进;;甘肃东部早侏罗世地层及植物群的初步研究[A];中国地质科学院西安地质矿产研究所文集(5)[C];1982年
6 牛夏;袁萌;赵世伟;;观赏凤梨的引种搜集与栽培[A];中国植物园(第十二期)[C];2009年
7 曲泽洲;王永惠;周吉柱;;棗花芽分化的初步观察[A];河北省果树学会论文选编(1962)[C];1962年
8 徐楚年;梁辉;郭玉海;寿元;贾君镇;林庆文;刘海虹;;红花(Carthamus tinctorius L.)的花器发育研究[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年
9 孙兆法;李梅;翟晓灵;王殿纯;韩明三;;根区加温对一品红生长发育和盆花品质的影响[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
10 张建斌;贾彩红;刘菊华;金志强;徐碧玉;;香蕉未成熟雄花再生体系的建立[A];中国园艺学会2010年学术年会论文摘要集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 黎云祥;珍稀濒危植物珙桐(Davidia involucrata)苞片差异表达基因的克隆与分析[D];四川大学;2002年
2 朱俊义;东北桤木和辽东桤木生物学特性研究[D];东北师范大学;2008年
3 魏岩;准噶尔荒漠几种藜科植物的种子多型性及其萌发行为研究[D];新疆农业大学;2007年
4 张泉;柏科植物雌球果发育的研究[D];中国科学院植物研究所;2001年
5 张文香;陆地棉开花相关基因GhMADS22/23/29的克隆与功能验证[D];中国农业科学院;2013年
6 杨永;中国麻黄属植物的分类—兼论麻黄属的演化[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2002年
7 宿静;中国引种的铁兰属植物系统分类及微形态研究[D];南京林业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 俞菊;盆栽一品红糖代谢生理及分子基础的初步研究[D];扬州大学;2007年
2 周楠楠;红桤木的生殖生物学研究[D];南京林业大学;2010年
3 刘曈;山东莎草族植物微形态学研究及基于形态证据的系统发育分析[D];曲阜师范大学;2010年
4 刘鹏伟;新疆两种滨藜属植物的种子萌发对策研究[D];新疆农业大学;2007年
5 廉彭彭;盐胁迫对白滨藜和疣苞滨藜种子萌发及早期幼苗生长的影响[D];新疆农业大学;2008年
6 闫小玲;基于广义形态学特征对连香树科系统位置的研究[D];陕西师范大学;2007年
7 高蕊;新疆角果藜的地上地下结果性及其生态适应[D];新疆农业大学;2007年
8 袁晓亮;雷竹花期生物学特性与花发育解剖学研究[D];浙江林学院;2007年
9 薛建国;水分、盐分和温度对几种荒漠植物种子萌发的影响[D];甘肃农业大学;2008年
10 马瑶;不同地理分布区紫椴形态解剖结构研究[D];东北林业大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 主持人 薛守纪;盆栽旱伞草[N];中国花卉报;2005年
2 主持人 薛守纪;盆栽虾衣花[N];中国花卉报;2005年
3 杨书才;一品红花期管理[N];河南科技报;2008年
4 宇宁 译自《种植者论坛》;今冬一品红流行品种预览[N];中国花卉报;2009年
5 建华;一品红的栽培技术[N];中国特产报;2004年
6 北京大汉农业科技有限公司种苗部销售经理 郑纲;一品红生殖生长期应注意哪些?[N];中国花卉报;2008年
7 陕西省苗木繁育中心 冯秀萍;红掌新品种及养护指南[N];中国花卉报;2008年
8 王静;一品红的养护[N];中国花卉报;2003年
9 钟秀媚 编译;全球一品红产业面面观(上)[N];中国花卉报;2007年
10 陕西省苗木繁育中心 冯秀萍;红掌栽培指南[N];中国花卉报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978