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去势SD大鼠骨髓细胞粘附分子的表达及其与正常大鼠骨髓单个核细胞差异表达基因文库的构建

王松  
【摘要】: 雌激素的缺乏可引起局部一些细胞因子变化,最终导致骨形成减弱,骨吸收加强。目前,关于雌激素的缺乏可引起局部一些细胞因子变化的研究中以炎症因子(IL-1、IL-3、IL-6等)、生长因子(TGF-β、IGF-1)等的研究较多。细胞粘附分子在绝经后骨质疏松发生的病理过程中具有一定的影响作用,它正日益受到人们的重视。近来,关于细胞粘附分子中的整合素在骨质疏松症发生作用的研究较多,但对于既是粘附分子又是胞内信号因子的CD44以及其配体FN和CD54的研究甚少。研究目的:为了探讨①去势后不同时间骨微环境骨髓细胞粘附分子CD44、CD54、FN的表达变化情况。②在雌激素的作用下骨微环境骨髓细胞粘附分子CD44、CD54、FN表达变化的情况。③绝经后骨质疏松发生过程中可能有新的还不为我们所知的基因或特异性强的差异基因的表达,并构建特异性差异基因文库。研究方法:本实验采用免疫组织化学研究SD大鼠去势后不同时期骨髓细胞CD44、CD54、FN的表达情况:同时本研究通过体外单个核细胞培养检测不同浓度的雌激素对体外培养的单个核细胞CD44、CD54、FN的表达;此外,本研究采用最新的 克隆基因方法一抑制性消减杂交(SSH)来构建去势后大鼠骨髓单个核 细胞与正常大鼠之间的基因差异表达文库。结论:体内研究表明,雌激 素影响着骨髓细胞CD44、CD54的表达。CD44、CD54可能介导单核细胞 之间的粘附并参于巨噬细胞的融合/破骨细胞的形成。雌激素对骨髓细 胞FN的表达影响不大。体外研究表明,一定浓度的雌激素在某一时间 点,激活细胞CD44大量表达,但在另一个作用条件下,雌激素又能抑 制 CD44的大量表达。CD44作为信号分子具有负反馈的机制。一定浓度 的Cp44介导单核细胞的融合最终形成多核的破骨细胞。雌激素能抑制 骨髓单个核细胞CD54的表达,这种抑制作用呈剂量依赖关系。CD54 参与了破骨细胞的形成及粘附作用。雌激素对单个核细胞FN的表达不 存在着剂量与作用时间的关系,本实验采用最新的克隆基因方法一抑 制性消减杂交(SSH)构建了去势后大鼠骨髓单个核细胞与正常大鼠之 间的基因差异表达文库,为最终找出在绝经后骨质疏松发生过程中新 的特异性强的表达基因(这些差异表达基因才是绝经后骨质疏松发生 的关键候选基因)打下了基础。


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