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小鼠小肠隐窝素基因的表达及大黄对其表达的影响

刘中武  
【摘要】: 目的:检测小鼠小肠隐窝素基因(mRNA)的表达;观察大黄对小鼠小肠隐窝素基因表达的影响,探讨大黄增强肠道屏障作用的机理。 方法:(1)检测小鼠小肠隐窝素基因(mRNA)的表达:将10只健康成熟昆明小鼠分为Cr1组和Cr4组。用颈椎脱臼法处死各鼠,分别切取各小鼠十二指肠、空肠、回肠标本,以生理盐水洗净血渍及粪便,用电子天平准确称量40mg各段小肠;按E.Z.N.A.(?)Total RNA Kit试剂盒提供的操作说明提取总mRNA;采用One Step RNA PCR Kit(AMV)试剂盒,按以下条件进行RT-PCR扩增:①50℃x30分钟;②94℃x2分钟;[③94℃x40秒;④60℃x40秒;⑤72℃x40秒]x30个循环;⑥72℃x5分钟;扩增后的PCR产物于1.5%的琼脂糖凝胶中,在90V恒压下进行电泳;以100bp Ladder DNA Marker为参照,运用美国Bio-Rad PAC型凝胶成像分析系统测出各靶条带的含量;按PCR产物纯化试剂盒提供的操作说明进行PCR产物纯化,纯化后的产物送基康公司进行DNA序列分析。(2)观察大黄对小鼠小肠隐窝素基因表达的影响:将20只健康的昆明小鼠随机分为实验组和对照组,实验组给予10%大黄煎剂灌胃,每次0.5ml,每6小时一次,对照组给予等量生理盐水,24小时后用颈椎脱臼法处死各鼠,剖腹切取小肠, 以生理盐水洗净血渍及粪便,量长称重,用电子天平准确称量40mg 各鼠小肠。然后按“(l)”中的相应步骤进行操作。 结果:①正常小鼠小肠各段均有隐窝素基因的表达,各肠段间隐 窝素一l基因(mRNA)表达量差异无统计学意义,P0.05(F二0.9531, 沙;二2,沙:=8);②各肠段间隐窝素一4基因(mRNA)表达量差异有 统计学意义,P0.01(F=35.661,分l=2,沙:=8),将各肠段间隐窝素 一4基因(mRNA)表达量的均数(十二指肠一2 13 .5 5 Ing/sul;空肠 一29 1 .1 sgngzsul;回肠一423.179ng/sul)进行两两比较,经q检验,p 值均小于0.01,差异均具有统计学意义,(回肠段与空肠段比较 q一7.436;回肠段与十二指肠段比较q二n.sll;空肠段与十二指肠段 比较q二4.374);③实验组和对照组小鼠在体重(t=l .289)、小肠长度 (t=0.081)、小肠重量(t=o.358)方面相比较差异均无统计学意义,P值 均大于0.20(沙=18);④实验组与对照组小鼠小肠隐窝素一1基因 (mRNA)表达量的均数相比,实验组(427.087ng/sul)略高于对照 组(409.223ng/sul),但差异无统计学意义(t=2 .567 0.1P0.2);⑤ 实验组和对照组小鼠小肠隐窝素一4基因(mRNA)表达量差异无统计 学意义(t=0.O43P0.5)。⑥隐窝素一l基因和隐窝素一4基因表达量 的相关关系无统计学意义。 结论:①正常小鼠小肠各段均有隐窝素基因的表达,隐窝素一4基 因(mRNA)表达量在十二指肠段最低,空肠段次之,回肠段最高; 而隐窝素一1基因(mRNA)表达量在各肠段间基本一致。②用大黄刺 激小鼠后,小肠隐窝素一1基因表达量有增加,但与对照组差别无显著 性;大黄似乎不影响小鼠小肠隐窝素一4基因的表达。③小鼠小肠隐窝 素一1基因和隐窝素一4基因表达无数量依存关系。


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