油菜（Brassica napus L）矮秆突变相关基因的RAPD标记与其序列特异扩增片段的分析

【摘要】：株高近2m的甘蓝型油菜高秆品系3529经快中子轰击及化学诱变剂联合处理，获得了株高仅70cm的矮秆突变体。该突变受呈加性效应的一对等位基因(dwfl／dwfl)所控制，杂合子(Dwfl／dwfl)为半高秆植株。本文采用该矮秆突变的纯合品系DDF-1及高秆亲本3529为材料，用50个10-mer随机引物对高矮植株亲本进行RAPD扩增，选出了7个在高、矮亲本植株间产生特异多态性扩增的引物，作为突变相关基因位点的特异分了标记。在F_2代的矮秆纯合体植株中利用这7个特异分子标记的随机引物扩增并进行连锁检验，从中筛选到4个与矮秆基因突变位点有紧密连锁的特异分子标记，根据这些标记的长度将它们分别命名为S5_(910)、S12_(610)、S29_(390)、S47_(720)，并计算了这4个特异分了标记与此突变位点的连锁图距，分别为S5_(910)：16.6cM，S12_(610)：0.0cM，S29_(390)：16.6cM、S47_(720)：5.0cM。 为了对矮秆突变相关基因进行定位，从4个RAPD分子标记中选出2个F_2代中重组率最低的标记S12_(610)和S47_(720)，这两个RAPD分子标记与矮秆突变位点连锁最为紧密，其中S12_(610)可能就位于这个与植株高度相关的基因中。再将这两个标记对回交世代的总DNA和一些其他品种的高秆油菜的总DNA进行扩增，确认了这两个RAPD标记的真实性。将这两个RAPD标记进行测序，得到其序列，其大小分别为S12_(610)：662bp和S47_(720)：680bp。研究了该序列特异扩增片段的特征并根据这个序列建立了2组SCAR标记。根据SCAR标记扩增的结果，没有能产生差异的条带，我们推测这种矮秆植株突变是点 四川大学硕_卜学位论文 突变，并且点突变的位置在原RAPD引物的序列上。再根据以SCAR引物和 RAPD引物对高秆和矮秆油菜总DNA扩增的结果分析，我们推测RAPD引 物的序列中发生突变的位点只在整个RAPD标记的下游一侧，其.仁游则是相 }司自勺)子列。 关键词:一甘蓝型油菜;矮秆突变;分子标记;RAPD;连锁图趾;SCAR标记