收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的构建和免疫调节研究

刘瑾  
【摘要】:除了探索生命奥秘的科学价值外,干细胞的研究将在人工器官、组织工程、创伤修复和人体功能重建的临床医学中有着极为广阔的应用前景。作为人体干细胞研究的外延,各种动物、特别是医学相关动物干细胞的研究也已悄然兴起。 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)不仅具有自我更新和多向分化潜能,而且是造血系统的主要支持细胞,被认为是临床干细胞治疗的理想细胞来源和基因治疗的理想细胞载体。免疫排斥和器官的获得是当今移植的两大障碍,干细胞移植的核心问题仍是免疫学问题。 降低移植物免疫原性和抑制受体免疫系统功能是当前同种异体临床和实验模型中常用的的避免和延迟排斥的方法。MSCs在同种异体临床和实验模型中移植后,能被宿主“接受”,并且在宿主体内长期存活(Horwitz et al.,2002)。不仅如此,将MSCs与同种异体皮肤共同移植后,皮肤存活时间明显延长(Bartholomew et al.,2002);与造血干细胞共同移植后,HSC“存活”率提高(Koc et al.,2000),以上资料提示,MSCs可能具有低免疫原和免疫调节特性。最近,对MSCs抑制同种异体T淋巴细胞增殖活性的免疫调节研究也取得较大进展,在干细胞研究领域掀起了新 四川大学博士学位论文 一轮热潮(Tse et al.,2003;Di Nieola et al.,2002;Krampera et al.,2002)。 供器官来源严重不足的问题已严重阻碍了器官移植术的推广和应用, 无论怎样开发,人体器官总是有限的。面对这样严峻的考验,异种移植 己被考虑为同种异体移植可能的有效替代途径之一。免疫排斥仍然是异 种移植的第一障碍,Saito等(1999)的研究极大突破了以往人们对异种移 植免疫排斥的认识,为异种成体干细胞移植提供了新的契机,但迄今为 止,关于MSCs在异种移植中的免疫调节现象及其分子机制的研究少之 又少,不利于异种MSCs的开发和应用。 版纳微型猪近交系(banna mini一pig inbred一line,BMI)己近交繁育到第 20世代,为世界唯一育成的近交系大动物,是异种移植中很有希望的供 器官源。此近交系猪来源的MSCs在干细胞治疗的基础和临床研究中尤 有价值。然而,MSCs的衰老和有限的增殖能力限制了它在体外的大量 增殖及对其生物学特征的深入理解,从而阻碍了其在临床和实验体系中 的应用,建立成体MSCs永生细胞系迫在眉睫。有文献报道,表达猴病 毒40(simian virus 40,SV4o)大T抗原足以使某些体细胞和干细胞逃避衰 老而永生化,因此该研究旨在(1)通过转基因技术将SV40抗衰老基因导 入BMI一MSCs,构建永生细胞系,并鉴定永生化MSCs干细胞形态和生 长特性,特异抗原表达,多向分化潜能和致瘤性,探讨其在移植和材料 生物相容性评价中的应用前景。(2)应用单向淋巴细胞混合培养模型,系 统研究永生化BMI一MSCS对异种T淋巴细胞增殖的免疫原及免疫调节特 性,初步探讨了其免疫抑制的分子机制,展望其在免疫调节和创伤修复 中的应用前景。 材料与方法 永生化BMI一MSCs的构建:密度梯度离心和贴壁法从第18世代BMI 的骨髓中分离原代MSCs。将含有SV40大T抗原和新霉素抗性基因的 质粒pSV3neo导入第3代BMI一MSCs。细胞增殖,干细胞标一记物表达, 四川大学博卜学位论文 分化潜能,衰老和致瘤性等用常规方法检测。 1.2x1O4hPBLS分别与等比例丝裂霉素C处理的永生化BMI一MSCs, BMI一PBLs,人脐静脉内皮细胞株ECV-304或10林g/m 1 Co叭于96孔板 共培养6天,以确定永生化BMI一MSCS的免疫原性。调整BMI一MSCS的 剂量,加入时间和混合培养时间,评价BMI一MSCS对hLPBL作用的剂量 和时间依赖关系。用培养池隔离BMI一MSCs和hPBLS,混培后评价细胞 ·细胞接触对抑制效应的影响。TGF一pl、FasL和IL一10抗体加入混培体 系,观察它们是否能阻碍BMI一MSCs的抑制作用。用MTS法测定细胞 增殖。结果以刺激指数51(Stimulation Index)和抑制率表示。 结果 (l)原代BMI一MsCs持续增殖20代后,生长停滞,SA一p一Gal阳性率 高达85%,流式分析显示,第15代BMI一MSCs在DNA含量小于2n的 区域出现明显的“凋亡峰”,提示此细胞群体在传代过程中,细胞逐渐衰 老。 (2) sv40转基因BMI一MSCs连续传180代后仍保持旺盛的增殖能力, 而仅少量细胞SA一p一Gal表达阳性,细胞凋亡率极低,导入SV40的 BMI一MSCS‘。寿命,,明显延长,获得‘泳生”。 (3)sv40转基因BMI一MSCs保持了正常BMI一MSCs的细胞形态,克 隆生长特性、以及干细胞特异抗原的表达。明确了单克隆抗体SH一2、 SH一3、SH一4、SB一10、SB一20、SB一21对应抗原在BMI一MSCs的表达分布 规律。 (4)永生化BMI一MSCs保持了正常BMI一MSCs的成骨分化功能,能 够促进多孔陶瓷材料的体内成骨。 (5)永生化BM卜MSCs与正常BMI一MSCs一样,生长有锚着依赖性, 在裸鼠体内未表现致瘤性。 (6)永生化BMI一MSCs不引起hpBLs的增殖反应,而同为BMI来源 四川大学博上学位论文 的PBLs,ECV一304和ConA却能刺激hPBL增殖。结果提示BMI一MSCs 可逃避异种T细胞的识别,具有低免疫原性。 (7)永生化BMI一MSCs对抗原或非抗原刺激引起的异种T细胞增殖 均有抑制效应,且呈时间和剂量依赖关系。此结果提


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李明;史远刚;;转化生长因子-β在母胎界面的表达调节作用[J];动物医学进展;2008年11期
2 赵艳景;胡虹;王颖;;藻蓝蛋白生理活性及作用机制研究进展[J];安徽农业科学;2011年11期
3 范青生,胡居吾,肖小年;菌草灵芝孢子粉增强免疫调节作用研究[J];中国食用菌;2005年05期
4 王啸啸,唐庆九,张劲松,杨焱,刘艳芳,贾薇,刘方;不同品质灵芝的抗肿瘤和免疫调节作用比较[J];食用菌学报;2005年03期
5 郑世民,张俐,闵亚宏,吴春艳,高雪丽;高压静电场对雏鸡细胞免疫功能及其调节的影响[J];激光生物学报;2005年05期
6 陈育枝;袁希平;张曦;;羊抑制素的研究进展[J];草食家畜;2006年01期
7 邹林;杨鸣琦;;苦马豆素抗肿瘤作用研究进展[J];动物医学进展;2006年04期
8 李玮;郭腾;陈洪亮;禚宝山;吴连勇;;紫锥菊研究进展及在动物保健上的应用展望[J];兽药与饲料添加剂;2006年03期
9 高建峰;胡庭俊;高艳艳;;黄芪多糖对小鼠免疫细胞NO-cGMP信号系统的效应[J];畜牧与兽医;2008年05期
10 吴培;刘扬;周小秋;冯琳;;芽孢杆菌对水生动物抗病力影响的研究进展[J];中国饲料;2009年16期
11 颜新敏;张强;;羊痘病毒免疫学研究进展[J];动物医学进展;2009年12期
12 盛荣华;陈靠山;;多糖对肠道黏膜免疫的影响及其抗肿瘤活性研究进展[J];现代农业科技;2011年01期
13 李玲;邓晓兰;赵兴兵;曾勇;欧阳冬生;;铁皮石斛化学成分及药理作用研究进展[J];肿瘤药学;2011年02期
14 孙丽萍;侯晓明;廖磊;张智武;;油菜蜂花粉及其组分对迟发型超敏反应的影响[J];蜜蜂杂志;2007年S1期
15 张旭晖;王恬;;α-生育酚及其衍生物对动物生长发育的调控[J];中国饲料;2011年02期
16 罗晓春,谢明权,黄玮,李安兴;鱼类粘膜免疫研究进展[J];水产学报;2005年03期
17 朱金明;论蜂胶与肾功能衰竭(一)[J];蜜蜂杂志;2005年10期
18 华雪铭;周洪琪;张冬青;李宁丽;余奇文;沈佰华;;多糖和益生菌对暗纹东方免疫功能的调节[J];水产学报;2006年02期
19 王鹏;江晓路;江艳华;曹杰铭;杨学宋;;褐藻低聚糖对提高大菱鲆免疫机能的作用[J];海洋科学;2006年08期
20 潘健存;陈静;李华;赖传成;李兴芳;王士长;;水牛初乳粉对免疫低下小鼠免疫功能的影响[J];中国乳品工业;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈国兵;;严重多发伤患者外周血NKT细胞的表达及临床意义[A];《中华急诊医学杂志》第八届组稿会暨急诊医学首届青年论坛论文汇编[C];2009年
2 张玲;黄友防;陆春妮;刘洪丽;胡庭俊;;罗汉果多糖分离提取及免疫药理作用的初步研究[A];纪念中国畜牧兽医学会中兽医学分会成立30周年中国畜牧兽医学会中兽医学分会2009年学术年会、华东区第十九次中兽医科研协作与学术研讨会论文集[C];2009年
3 周光炎;;Ⅱ类反式激活因子、免疫调节和肿瘤免疫[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年
4 王维;王静;刘春红;ITALIANI,Paola;BORASCHI,Diana;马世平;瞿涤;;穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞活化及特异性抗体应答的影响[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年
5 周海云;江丽君;;静注免疫球蛋白的协同免疫免疫调节研究进展[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
6 牛春;姜洪杰;黄松;;IL-2对旋毛虫不同虫株的免疫调节[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
7 崔乃杰;崔乃强;崔华雷;付强;;SIRS-MODS-MOSF与免疫调节障碍(IRD)及免疫麻痹(IP)——(有关SIRS-MODS发病机理及对策的商榷)[A];第七届全国中西医结合普通外科临床及基础研究学术会议论文汇编[C];2001年
8 叶雪芳;季天荣;陈庄;;细菌CpG DNA免疫增强作用的研究进展[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年
9 陈立翠;谭艳;;采用中医脏腑辨证和免疫调节方法治疗小儿抽动-秽语综合征[A];第八届全国中西医结合实验医学研讨会论文汇编[C];2006年
10 邓为民;韩钦;李宏钊;赵春华;姚智;;异基因骨髓源间充质干细胞对BXSB小鼠T,B细胞的影响[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(二)[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘瑾;版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的构建和免疫调节研究[D];四川大学;2004年
2 周莲娣;香菇多糖对约氏疟原虫感染BALB/c小鼠红内期免疫应答调节的实验研究[D];中国医科大学;2008年
3 余素红;大黄鱼免疫应答的功能蛋白质组学研究[D];厦门大学;2008年
4 张晨晓;泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用机理[D];华中科技大学;2005年
5 萨仁娜;海带岩藻聚糖分级纯化及对肉仔鸡巨噬细胞免疫调节的研究[D];中国农业科学院;2008年
6 马翠丽;天花粉蛋白新有效组分的纯化、一级结构及免疫调节和抗肿瘤活性研究[D];吉林大学;2008年
7 苗晋锋;卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对内毒素(LPS)诱发实验性乳腺炎影响的研究[D];南京农业大学;2008年
8 刘晓丽;余甘子多酚的分离、鉴定与生理活性研究[D];华南理工大学;2007年
9 马丽辉;骨髓间充质干细胞治疗类风湿关节炎机制和相关研究[D];山西医科大学;2008年
10 陈清华;牛膝多糖对猪的营养效应和免疫调控机理研究[D];湖南农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 靖雪妍;大豆复合物和大豆皂苷的免疫调节作用研究[D];吉林大学;2007年
2 安方玉;嗜酸性粒细胞增高模型小鼠的抗肿瘤及免疫调节活性研究[D];兰州大学;2008年
3 谷锐;华蟾素参与葡萄膜炎免疫调节机制的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2008年
4 洪再发;骨髓间充质干细胞免疫学特性研究[D];福建医科大学;2009年
5 杨超;骨髓间充质干细胞对心脏移植免疫调节作用的实验研究[D];华中科技大学;2008年
6 刘春雅;连续性高容量血液滤过对多器官功能障碍综合征的免疫调节作用[D];浙江大学;2005年
7 郑金粟;痰热清注射液对流感病毒FM_1感染小鼠肺损伤及免疫功能影响的研究[D];北京中医药大学;2005年
8 王丹;鳖甲煎丸化裁方对肝癌22荷瘤小鼠抗肿瘤作用及免疫调节功能的实验研究[D];辽宁中医药大学;2007年
9 任含平;银屑解忧膏对小鼠免疫系统的影响[D];大连医科大学;2008年
10 罗李媛;川牛膝多糖的提取工艺及其对肉鸡免疫调节作用的研究[D];四川农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 魏妍平;MSCs研究列入豫重大攻关计划[N];中国医药报;2004年
2 于建港 邢燕霞;R4网络接口和电路域容灾技术[N];人民邮电;2005年
3 李大庆;免疫调节及其在人类疾病中的临床应用国际会议在京召开[N];科技日报;2008年
4 黄显斌 何巍;急性乙肝免疫调节机制被揭示[N];健康报;2009年
5 张中桥;异体MSCs移植有利于梗死心肌功能修复[N];中国医药报;2004年
6 壳寡糖与人类未来健康工程专家委员会委员、主任医师 李玲如;壳寡糖的免疫调节之旅[N];保健时报;2010年
7 通讯员 钱勇 记者 范又;我国成功重建永生化人脐静脉内皮细胞[N];光明日报;2003年
8 钱勇;永生化人脐静脉内皮细胞重建成功[N];中国医药报;2003年
9 记者唐先武 特约记者钱勇;永生化人脐静脉内皮细胞重建成功[N];科技日报;2003年
10 本报记者 刘正午;多元化试水 五年造一个新地奥?[N];医药经济报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978