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黄花石蒜凝集素的纯化及性质研究

荣艳珍  
【摘要】:黄花石蒜球茎经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱(DEAE-Sepharose)和Sephacryl S-200分子筛层析得到经SDS-PAGE检测为单一蛋白带的黄花石蒜凝集素(Lycoris chinensis agglutinin,LCA)纯品。经SephacrylS-200凝胶过滤和SDS-PAGE测得其表观分子量为48KD,亚基分子量为12KD,表明LCA是由四个相同亚基组成的蛋白。LCA只凝集兔血细胞,其凝集兔血细胞效价为0.95ug/ml,但是对鸡血及人A、B、AB、O型血均不凝集。其凝血活性部分依赖于金属离子Ca~(2+)、Mg~(2+)。糖抑制实验结果表明,甘露聚糖是LCA的专一性抑制糖,其次是甘露糖。 295nm激发时,天然LCA的最大荧光发射峰在337.2nm处,比游离Trp的最大荧光发射峰348nm蓝移了10.8nm,说明Trp周围的极性较弱,并未完全暴露于周围溶剂中。280nm激发时,其最大荧光发射峰也在337.2nm处,荧光强度增加,说明LCA的内源荧光发生了从Tyr到Trp的能量转移。 研究了不同温度、pH和变性剂对LCA凝血活性和荧光光谱的变化,当温度达80℃以上时,活性开始下降,100℃处理20分钟,LCA仍保留60%活性;pH为4—12对活性的影响不大,pH为2时,完全丧失活性;温度的升高和pH的改变对荧光光谱影响不大。表明LCA对热,酸碱具有较强的耐受性。 用荧光光谱法研究了三种变性剂脲、盐酸胍、SDS在不同浓度下构象的变化和凝血活性的变化情况。盐酸胍变性时,LCA荧光最大发射波长和荧光强度随盐酸胍浓度的增大而逐渐增大,其后随盐酸胍浓度的逐渐增大反而逐渐减小。


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