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茶树菇凝集素(Agrocybe cylindracea Lectin)的分离纯化及部分性质研究

赵曦  
【摘要】:本文对茶树菇凝集素(Agrocybe cylindracea lectin, ACL)的研究主要包括分离纯化及部分性质研究。 将茶树菇子实体撕碎,用搅拌机捣碎,加入生理盐水拌均,4℃静置过夜后离心,再经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose离子交换、Sephacryl S-200分子筛层析及CM-Sepharose离子交换,得到纯化的茶树菇凝集素样品,冻干。Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤测得ACL表观分子量31.2kD,对该样品进行SDS-PAGE电泳分析,结果得到两条带,且分子量约为16.1kD和15.3kD,表明ACL是由两个不同亚基组成的二聚体。 对兔血细胞以及健康人血A,B,AB,O型的活性人作活性检验,发现表明ACL对兔及健康人A、B和AB型血细胞都有凝集作用,只是相对A型血细胞凝集能力弱些。 ACL的荧光光谱研究表明在激发光为280nm时,其最大荧光发射峰在337nm处,荧光光谱未见有酪氨酸(Tyr)残基的发射峰,表明Tyr残基的荧光基本上通过能量转移到Trp上,使荧光强度增强,在激发光谱为295nm时,其最大荧光发射峰也在337nm处,比游离Trp的最大荧光发射峰(348nm)蓝移了近10nm,说明Trp周围的极性较弱,处于疏水的微环境。 用NBS修饰Trp,Trp的β-吲哚基的破坏使活性完全丧失,表明Trp对凝血活性是至关重要的;经计算测得每分子ACL中含有2.09个Trp残基;Arg、Tyr、Ser、巯基被修饰后,ACL的凝血活性并未受到大的影响;用NEM修饰巯基,测得没分子中有1个巯基。用DEPC对组氨酸的β-咪唑进行特异化学修饰后,其凝血活性没有明显的下降,表明β-咪唑基不是凝血活性的必


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