西红花花器官组织培养研究及CsZCD基因在大肠杆菌中的表达

【摘要】：西红花(Crocus sativus L)系鸢尾科多年生草本植物,是一种珍贵药材,还用作天然香料、染料,用途广泛。为了扩大西红花的种源和药用成分来源,本论文对西红花进行了组织培养和分子生物学两方面的研究:用西红花的花被和花柱建立了西红花愈伤组织诱导、抗生素筛选,柱头状物诱导、继代、优化,和离体开花的体系;同时将西红花酸合成酶(7,8-二加氧酶)CsZCD基因在大肠杆菌中的表达,纯化蛋白。结果如下: 1.以西红花的柱头、雄蕊、子房、花被、花柱、侧芽、幼叶诱导愈伤组织和柱头状物,结果表明花被和花柱在MS+NAA5 mg·L~(-1)(单位下同)+6-BA5+蔗糖4%+琼脂0.8%和B_5+KT5+IAA4+2,4-D1+Pro 0.5+蔗糖3%+琼脂0.8%的培养基上愈伤组织和柱头状物的诱导情况最好,在B_5+KT5+IAA4+2,4-D1+Pro 0.5+蔗糖3%+琼脂0.8%培养基上,诱导的松散型花柱愈伤组织易于继代。 2.以西红花的花被和花柱为外植体诱导培养花柱柱头状物,以MS+NAA5+6-BA5+蔗糖4%+琼脂0.8%和B_5+KT5+IAA4+2,4-D1+Pro 0.5+蔗糖6%+琼脂0.8%为诱导培养基,选取不同长度的顶芽,在不同的温度、光照条件,以及蔗糖梯度浓度条件下,对柱头状物再生的条件进行优化。结果表明,在培养基MS+NAA5+6-BA5+蔗糖6%+琼脂0.8%上,18℃,黑暗条件下培养,花被柱头状物再生的诱导率达75.0%。 3.以西红花的柱头、雄蕊、花被和花柱诱导离体开花,结果表明在20±2℃,黑暗培养条件下,只有花被和花柱诱导出离体开花。花被在培养基MS+