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一种新的来源于人的穿膜肽的功能和对生物节律影响的研究

彭涛  
【摘要】:目的 研究一种新的人体蛋白结构域(Circadian locomoter output cycles kaput protein's DNA-binding peptide,hCLOCK's DNA_BIND,hClock-(35-47))对多种细胞细胞膜的穿膜作用及其通过大鼠血脑屏障的作用。在此基础上,进一步探讨了hClock-(35-47)通过细胞膜的一些相关机理,及其内化入细胞后对细胞近日节律基因转录的影响。 方法 化学合成hClock-(35-47),N端标记FITC绿色荧光素,与培养的血管内皮细胞(ECV-304)和原代培养的神经胶质细胞孵化一定时间后,荧光显微镜下观察其对多种细胞细胞膜的穿膜作用,并采用Image-Pro Plus(Version 4.5 for Windows~(TM))来分析细胞荧光强度。采用MTT比色实验测定hClock-(35-47)的细胞毒性。在此基础上,经大鼠颈总动脉注射hClock-(35-47)后,做大鼠大脑冰冻切片,荧光显微镜下观察其通过大鼠血脑屏障进入脑细胞的情况。在培养基中加入肝素,通过在荧光显微镜下观察标记FITC的hClock-(35-47)内化入细胞的情况,来了解肝素对hClock-(35-47)内化入细胞的抑制


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