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粗毛栓菌漆酶的生化和分子生物学研究

董佳里  
【摘要】:利用RB亮蓝平板检测方法发现,粗毛栓菌(Trametes gallica)有较强的漆酶产生能力,其显色反应明显强于黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)。 对液体培养条件下粗毛栓菌产生漆酶的研究表明,2%以下的胰蛋白胨能明显促进漆酶的产生;高碳(1%葡萄糖)条件下产生的漆酶明显高于低碳条件;高浓度铜离子(200μmmol/L)能有效促进该菌漆酶的产生;胰蛋白胨-葡萄糖培养基(TG)和细菌用蛋白胨-2%葡萄糖培养基(PG)产生的漆酶活性最高。 研究了59种芳香类化合物对粗毛栓菌漆酶产生的影响,发现27种对漆酶产生有促进作用,其中对苯二酚作用最强;另外32种化合物在不同程度上抑制漆酶的产生,对硝基苯酚和2,6-二氯苯酚的抑制作用最强;不同取代基化合物、同分异构体化合物对漆酶产生表现出一定规律性,其中对位、邻位和间位的芳香化合物的促进产酶作用按对位间位邻位排列。 用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳活性染色法研究了12种培养基对粗毛栓菌漆酶同工酶谱的影响。结果表明,不同培养基产生不同的漆酶同工酶谱。其中在振荡培养条件下,马铃薯提取物-酒石酸铵-葡萄糖培养基(PAG)和氨基酸混合物-酒石酸铵-葡萄糖培养基(AAG)均可产生多达14条漆酶同工酶谱带,而在静置培养下的PAGⅠ培养基产生的同工酶带仅为4条。综合各种培养条件,粗毛栓菌产生的漆酶同工酶数目高达20种,是迄今发现产生漆酶种类最多的一种真菌。 通过硫酸铵沉淀,DEAE-sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析,Sephadex


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