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nm23-H1提高顺铂化疗敏感性的实验研究

郅克谦  
【摘要】:Steeg首先从鼠黑色素瘤细胞株中分离出nm23基因,认为它与肿瘤转移呈负相关,随后的实验也证实nm23基因在抑制肿瘤转移中的作用。最近研究表明,nm23-H1与抗肿瘤药的敏感性有一定关系,在乳腺癌研究中发现,nm23-H1与顺铂化疗敏感性密切相关,本研究旨在对nm23-H1提高顺铂化疗敏感性的可能机制作一初步探讨。 首先采用基因转化技术,制备高纯度的nm23-H1真核表达质粒并对其进行鉴定。通过阳离子脂质体介导,将nm23-H1导入Tca8113细胞,建立稳定表达细胞株,采用免疫组化、western-blot和流式细胞仪技术对表达产物进行鉴定。我们成功制备大量nm23-H1真核表达质粒,采用限制性内切酶酶切证实nm23-H1插入片断长度为986bp。转染后稳定表达的Tca8113细胞,nm23-H1蛋白表达明显增高。 然后通过体外实验观察转染前后Tca8113细胞对顺铂的化疗敏感性,分别用MTT法、检测罗丹明的荧光强度、流式细胞仪和等离子质谱仪检测杀伤率、线粒体膜电位、细胞凋亡和细胞内铂离子浓度的变化。体外实验中发现,顺铂对转染后Tca8113细胞的杀伤率,细胞凋亡比例和细胞内铂离子浓度均有明显提高,这种作用能被Na(+)/K(+)-ATP酶的抑制剂哇巴因明显抑制;顺铂可明显降低转染后Tca8113细胞的线粒体膜电位。


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