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颅神经嵴干细胞的体外分离培养及其成牙分化诱导研究

江宏兵  
【摘要】:本课题结合牙胚发育生物学、干细胞生物学及组织工程技术的有关研究成果和方法,探索性地分离培养牙胚发生的上游干细胞—颅神经嵴干细胞(cranial neural crest stem cell, CNCSC),并以其为种子细胞,进行成牙本质样细胞表型分化的定向诱导,旨在确立CNCSC用于牙再生的可行性,为进一步开展功能性牙组织工程研究奠定理论和方法学基础。 颅神经管组织块无血清条件培养法分离培养CNCSC,形态学、BurdU渗入及免疫荧光细胞化学等方法鉴定其生物学性状及干细胞特征。原代培养的CNCSC形态上呈梭形成纤维样细胞,特异性标记物HNK-1阳性表达;表现为克隆样生长、自我更新以及在不同诱导条件下出现多向分化能力等干细胞特征。本实验成功地获取CNCSC,并呈现多潜能干细胞的生物学性状,为研究其牙向分化诱导确立细胞学基础。 无血清条件培养法培养颅神经管组织块,通过Hoxa2原位杂交及vimentin免疫荧光细胞化学染色鉴定细胞分化表型。结果发现,迁出前颅神经嵴细胞在100ng/ml FGF8作用下,呈现第一鳃弓外胚间充质细胞表型分化,呈现Hoxa2阴性表达而vimentin阳性表达。本实验证实,FGF8可诱导CNCSC向第一鳃弓外胚间充质细胞表型分化,且具有早期诱导时相性特征,为进一步诱导其牙向分化提供理论及实验


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