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包载反义RNA重组腺病毒微球的制备及逆转肝细胞癌MRP的研究

余少鸿  
【摘要】:目的:构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)基因的重组腺病毒微球并转染人肝癌耐药细胞株,并进行肝动脉栓塞治疗,了解包载反义RNA重组腺病毒微球逆转肝细胞癌MRP的治疗效果,为高分子化学与基因治疗的结合提供临床应用的理论基础。 方法:采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA)包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制成微球,体外测定微球的粒径、载病毒量、包封率及释放规律,并用其转染人肝癌耐药细胞株HepG_2/ADM,48h及120h后检测转染细胞荧光强度。MTT法检测耐药细胞的阿霉素半数致死量(IC_(50));流式细胞仪检测细胞内红色荧光强度,以荧光指数FI代表DNR浓度;以β-actin为内参照,以RT-PCR法观察转染48h及120h后耐药细胞MRPmRNA的表达量高低,比较MRP的逆转情况及反义基因表达的特异性及作用的时效关系。设不做任何处理组,生理盐水组,空白微球组,携带反义MRP的重组腺病毒组为对照,观察经肝动脉注射rAdV微球的靶向性效果:动态测定rAdV微球在肝癌组织及癌旁组织,肾肺组织内的分布,观测肿瘤体积大小、肿瘤生长率及平均生存时间。 结果:成功地构建了携带反义MRP基因的重组腺病毒微球,直径约


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