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前脂肪细胞与小肠粘膜下层构建组织工程脂肪的体外实验研究

兰海  
【摘要】:目的:前脂肪细胞(Preaidpocyte PRA)能定向分化为成熟脂肪细胞,而小肠黏膜下层(small intestinal submucosa SIS)与多种细胞都有良好的生物相容性。因此将PRA与SIS复合植入体内从而实现脂肪组织的再生具有一定的可行性,这就为脂肪组织缺损的修复这一临床难题提供了新的解决方案。为了成功构建组织工程脂肪,了解PRA与SIS的生物相容性是很有必要的。本研究的目的是:体外培养PRA并与SIS复合,研究PRA在SIS上的黏附,生长,分化情况。方法 (1)术中切取成年女性腹部皮下脂肪组织,用酶消化法,体外分离培养PRA,并进行传代扩增。(2)将第3代PRA与SIS复合,利用噻唑蓝(MTT)法检查在不同接种密度,不同预湿方法,不同接种方法条件下的黏附能力。(3)将PRA接种在SIS上分为加诱导剂组和不加诱导剂组,均设置在孔板内培养的细胞作为对照,在不同时间点用MTT法检测细胞的相对数量,并绘制生长曲线,分析PRA在不同培养条件下的增殖能力。(4)流式细胞仪检查在SIS上生长的PRA的细胞周期,增殖,凋亡情况,并以孔板内培养的细胞作为对照组。(5)利用光学显微镜镜和扫描电镜观察不同时间PRA生长,黏附情况。(6)接种在SIS的细胞组,从培养瓶消化的细胞组以及从SIS上消化的细胞组共三组细胞均用加有诱导剂的培养基培养,分别于1天,7天,14天三个时间点,用油红O染色法测定不同时间点细胞内的脂肪含量,比较三组细胞的分化成脂能力。结果(1)成功地分离,培养出PRA,在体外大量扩增,并能诱导成


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