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巨噬细胞炎症蛋白3β(Mip3β)重组腺病毒疫苗抗肿瘤实验研究

侯建梅  
【摘要】:目的: 巨噬细胞炎症蛋白3β(Macrophage inflammatory protein 3β,Mip3β),又名ELC(EBI-1 Ligand Chemokine)、CCL19,是一种通过生物信息学方法发现的CC类趋化因子。Mip3β集中表达在淋巴组织,它能够趋化T细胞、DC细胞、NK细胞以及巨噬细胞等多种细胞。Mip3β通过与受体CCR7特异性结合发挥生物学效应。Mip3β-CCR7的相互作用在促进DC细胞与T细胞接触并呈递抗原从而激发有效免疫反应等方面发挥重要作用。本研究中,我们采用复制缺陷型腺病毒作为载体,构建了表达小鼠Mip3β的重组复制缺陷型腺病毒,采用瘤内注射的方法观察其抗肿瘤效应,并对其作用机制进行了初步探讨。 方法: (1)将小鼠Mip3β基因克隆入穿梭质粒载体pShuttle中得到pShuttle-Mip3β。再用PmeⅠ限制酶将pShuttle-Mip3β酶切线性化,与超螺旋的骨架质粒pAdEasy-1经电穿孔共转化重组酶阳性(recA+)的宿主大肠杆菌BJ5183。 (2)将腺病毒质粒用PacⅠ酶切后,用脂质体(Lipofectamine)包裹并转染整合了腺病毒E1和E3区的人胚肾细胞株293E1。约10天后得到包装的重组腺病毒,命名为Ad-Mip3β。进一步做RT-PCR,Western


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