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锌指蛋白A20保护大鼠肝移植急性排斥模型中供肝内皮细胞的实验研究

彭方兴  
【摘要】:目的 ① 构建锌指蛋白A20重组腺病毒。② 通过同种异体肝移植急生排斥模型(Wistar→SD大鼠)受体大鼠静脉注射A20腺病毒或对照腺病毒,观察锌指蛋白A20对同种异体肝移植免疫排斥的抑制作用及其机制。试图阐明锌指蛋白A20对同种异体移植肝的保护作用及其机制。 方法 ①从携带有全长小鼠A20 cDNA的质粒pCAGGS-FLAG-A20获得A20 Nco I→Sal I 2332bp的基因片段,将其克隆到腺病毒载体AdEasy系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,经293细胞包装生成携带A20基因片段的重组腺病毒rAdEasy-A20,同法生成对照空腺病毒rAdEasy。②参照“二袖套法”建立Wistar→SD大鼠同种异体肝移植动物模型,将供、受体大鼠随机分为3组:单纯肝移植组、肝移植对照腺病毒治疗组、肝移植A20腺病毒治疗组,供体大鼠于术前24h经阴茎静脉注射5×10~9pfu A20腺病毒或5×10~9pfu对照空病毒或同体积生理盐水。术后第7天或濒死前处死部分受体鼠取肝和血液等标本,HE染色观察移植肝组织免疫排斥病理变化,全自动生化分析法检测肝功能变化,免疫组化检测移植肝组织VCAM-1表达变化,TUNEL法检测移植肝肝细胞凋亡情况;观察受体大鼠存活时间。


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