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HSP70反义寡脱氧核苷酸促进MRC-5细胞衰老的实验研究

赵志颖  
【摘要】:【目的】 通过人类HSP70(heat shock protein 70,热休克蛋白70)反义寡脱氧核苷酸,阻断MRC-5细胞(人胚肺二倍体成纤维细胞)HSP70蛋白表达,观察不同时间点HSP70蛋白水平、细胞凋亡及G1期细胞比例的变化,探讨HSP70与细胞衰老及细胞凋亡的关系。 【方法】 1)根据不同OND(oligodeoxynucleotides,寡脱氧核苷酸)及脂质体浓度设计ODN组、脂质体组、ODN-脂质体复合物组及空白对照组共21个组别,用MTT法测定各处理方式对MRC-5细胞增殖的影响。2)用第一步实验确定的正义寡脱氧核苷酸和反义寡脱氧核苷酸(anti-senseoligodeoxynucleotides,AS-ODN)及脂质体的最佳作用浓度分别转染两组细胞,于转染后12小时、1天、3天和5天,用流式细胞仪、免疫荧光显微镜检测HSP70蛋白的荧光强度、细胞凋亡及细胞周期。3)设立正义、反义和空白对照三个组,分别于转染后2天、4天和6天取各组细胞爬片,行衰老相关的β半乳糖苷酶(senescence-associated β-Gal,SA-β-Gal)染色检测蓝染细胞。 【结果】 1)各时间点反义组蛋白表达均低于正义组(P0.05),且其抑制作用在转染后12小时最强。反义和正义组细胞在转染后均出现蛋白表达高峰,但反义组高峰(转染后第1天)较正义组高峰(转染后第3天)提前。2)各时间点反义组细胞凋亡率均高于正义组(P0.05),两组细胞凋亡率均在转染后第1天达到高峰,其后逐渐下降。3)各组细胞随着观


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