骨髓间充质干细胞在肝损伤模型小鼠体内向肝细胞分化
【摘要】：目的:建立体外分离培养骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的有效方法,观察BMSCs能否在有再生需求的小鼠体内向肝细胞分化,以及BMSCs移植能否促进肝脏的再生。
方法:以含20%胎牛血清的DMEM低糖培养基,原代细胞直接贴壁培养,48小时后换液继续培养,待细胞生长铺满后(原代约8-10天,以后5-7天)消化传代,从雄性BALB/C小鼠骨髓中分离BMSCs。光学显微镜下观察细胞形态及生长特性。流式细胞仪检测新鲜分离的骨髓细胞与第五代的BMSCs CD_(44)与CD_(29)的表达。
BMSCs移植实验动物共50只。除Y染色体阳性对照1只为雄鼠外,其余均为雌鼠,包括Y染色体阴性对照1只,正常对照组16只,模型组16只,BMSCs移植组16只。20%戊巴比妥麻醉后打开腹腔,从肝蒂处结扎并切除中叶肝脏,移植组肝右叶注射PBS稀释的源自BALB/C雄性小鼠的BMSCs 0.4×10~5/只,模型组肝右叶注射等体积的PBS后关闭腹腔。
术后立即观察动物进食、饮水等一般情况。术后5日及14日分别处死正常对照组、模型组与BMSCs移植组小鼠各8只。观察肝脏大体改变;心脏取血,检测肝功能;称体重与肝重,计算肝脏脏器指数;取注射肝叶与非注射肝叶,制备组织芯片,HE染色观察肝脏病理改变。
BMSCs移植受鼠分别取注射肝叶、非注射肝叶、阳性对照肝组织及阴性对照肝组织制备组织芯片,在同一张芯片上同时用原位杂交检测Y
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