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Tumstatin基因的克隆、表达及其与吉西他滨联合抗肿瘤作用的实验研究

姚兵  
【摘要】:目的: 探讨Tumstatin基因表达对恶性实体肿瘤生长的抑制作用以及利用Tumstatin基因与吉西他滨联合治疗肿瘤的可行性及其有效性,为Tumstatin抗血管生成基因治疗联合化疗治疗恶性实体肿瘤提供依据。 方法: 1.PCR扩增的Tumstatin cDNA。 2.采用DNA定向连接技术构建Tumstatin基因重组真核表达载体。 3.重组真核表达载体中Tumstatin cDNA片段限制性内切酶酶切分析和测序。 4.Tumstatin基因分泌型重组真核表达质粒转染COS-1细胞,体外蛋白表达检测,内皮细胞增生抑制实验。 5.重组Tumstatin与吉西他滨联合体外抑制细胞实验。 6.肌肉注射pSecTag2B-Tumstatin(pSecTag2B-Tum),局部肌肉组织及血液重组Tumstatin表达检测。 7.建立小鼠肿瘤模型,Tumstatin基因治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤生长、小鼠生存期。 8.Tumstatin基因治疗与吉西他滨联合治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤生长、


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