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菌膜在原发舍格伦综合症发病中作用的实验研究

何巍  
【摘要】:研究目的:明确细菌菌膜与原发SS的发病关系,通过研究菌膜成分藻酸盐诱发的免疫反应对正常腮腺腺细胞的作用探讨原发SS发病机理,采用藻酸盐诱发人类原发SS临床表现的动物模型。 研究方法:首先分离获取成活率高且保持功能的腮腺腺细胞,采用改良DMEM培养基进行腮腺腺细胞的原代及传代培养,观察腮腺腺细胞生长状况,透射电镜观察腮腺腺细胞的超微结构,利用细胞免疫组化法检测细胞中泛角蛋白、α-淀粉酶蛋白和肌动蛋白的表达情况以鉴定细胞来源,并且分别检测α-淀粉酶蛋白在不同代次腺细胞中的表达情况判断其分泌功能。 将藻酸盐(Alginate)与BSA偶连形成具有较强免疫原性的Alginate-BSA交联物免疫兔,按抗原量1.0mg/kg接种于新西兰白兔皮内,间隔10d加强免疫1次,共加强4次后,利用间接ELISA法检测藻酸盐抗体效价:将原代培养的兔腮腺腺细胞按10~4个/ml接种到96孔板上,置入细胞培养箱继续培养3d,分为5组:A空白对照组、B牛血清白蛋白组、C藻酸盐组、D抗藻酸盐血清组和E抗藻酸盐血清+藻酸盐组,分别加入PBS、牛血清白蛋白、藻酸盐或(和)新鲜抗藻酸盐血清继续培养,分别于1h、6h、12h和24h不同的时间点,取出96孔培养板,采用MTT法检测5组腮腺腺细胞增殖情况;


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