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hOGG1基因低表达在肺癌发病及治疗机制中的探索

吴媚  
【摘要】:随着科技的进步和工农业的发展,越来越多的致癌物和污染物进入环境中。无机砷、多环芳烃、石棉、煤焦油及香烟烟雾、汽车尾气、烹调油烟等环境混合物都被认为是肺癌发生的重要因素。毒理学和分子流行病学研究提示,环境致癌物和污染物可通过对DNA的氧化损伤改变体内8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-OHdG)水平,人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶-1(human 8-oxoguanine DNA glycosylase-1,hOGG1)是DNA氧化损伤修复途径中清除8-OHdG的关键酶。为了研究hOGG1基因低表达对肺癌细胞氧化损伤敏感性的影响,为揭示环境致癌物和污染物通过氧化损伤导致肺癌的机制提供更有力的证据,本文首先通过G418耐受试验以验证hOGG1基因特异性锤头状核酶基因是否已稳定转染入细胞中,并观察细胞的生长特性、群体倍增时间及集落形成能力等以了解hOGG1基因低表达细胞A549-R的生物学特性,然后以人肺腺癌A549细胞和A549-R细胞为研究对象,通过MTT试验、彗星试验和抗氧化酶活性检测比较了两种细胞在重铬酸钾、苯并(a)芘、汽车尾气提取物、香烟烟雾提取物和烹调油烟冷凝物等环境致癌物和环境混合物处理后DNA氧化损伤修复能力及细胞抗氧化能力。结果显示,A549-R细胞表现出了对G418的抗性,而未转染的A549细胞在含G418的培养基中则不能生存,两种细胞在形态学上没有明显的差异,生长特性也基本一致;选用的几种环境致癌物与环境混合物作用于A549细胞和A549-R细胞均表现出明显的细胞毒性,而对A549-R细胞的毒性更大,A549-R细胞的半数抑制浓度(IC_(50))较A549细胞更低;几种物质均能引起细胞明显的DNA损伤,而A549-R细胞损伤程度较之A549细胞更加严重,且更加不易修复;这几种物质还可导致细胞内重要的抗氧化酶SOD和GSH-Px活性降低,并且A549-R细胞内酶活性的降低程度更大。说明hOGG1基因低表达使细胞对环境致癌物和污染物引起的氧化损伤更加敏感,提示环境致癌物和污染物


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