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川泽泻(Alisma plantago-aquatica.Linn)块茎凝集素的分离纯化和性质研究

刘超  
【摘要】:川泽泻(Alisma plantago-aquatica)球茎经磨碎、匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀得到粗品,将粗品用于阴离子交换柱(DEAE-Sepharose)、甲壳素亲和层析和SephacrylS-100分子筛层析得到凝集素纯品。在变性剂巯基乙醇存在和不存在的条件下经SDS-PAGE检测均为单一蛋白带,分子量约为22.4KD,SephacrylS-100凝胶过滤测得其表观分子量约为22.5KD,表明APL是由单亚基组成的蛋白。APL能凝集人ABO血红细胞,不凝集兔血红细胞,其凝集人血细胞的效价为1.8ug/mL。泽泻凝集素凝血活性依赖于Ca~(2+)、Mg~(2+)。糖抑制实验结果表明,N-已酰葡萄糖胺能抑制APL的凝血活性。中性糖含量的测定,含有4.26%的中性糖,表明泽泻凝集素是一种糖蛋白。 APL的荧光光谱研究在激发光为280nm时,其最大荧光发射峰在328nm处,荧光发射光谱未见有酪氨酸(Tyr)残基的发射峰,表明Tyr残基的荧光通过能量转移到Trp上,使荧光强度增强;在激发光谱为295nm时,其最大荧光发射峰也在328nm处。比游离Trp的最大荧光发射峰(348nm)蓝移了近20nm,说明Trp周围的极性较弱,处于疏水的非极性微环境,并未暴露于周围的溶剂中。研究不同温度、pH和基团特异性化学修饰后APL凝血活性的变化和荧光光谱的变化,当温度达60℃以上时,活性开始下降,到70℃时活性仅有42%保留,到80℃时凝血活性全部消失;当pH为4时,活性仅保留20%,pH为6-8对活性的影响不大,最适的pH值为6.8左右,pH9.0时凝血活性只有40%。由此表明


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